改造酵母无细胞蛋白合成系统分析Ssa蛋白的伴侣功能-猫眼课题宝

改造酵母无细胞蛋白合成系统分析Ssa蛋白的伴侣功能

批准号：

07780621

负责人：

西川周一

金额：

$0.58万

依托单位：

Nagoya University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

财政年份：

1995

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1995 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780621/

关键词：

分子シャペロン hsp70 ミトコンドリア膜透過無細胞タンパク質合成系

项目摘要

项目成果

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本研究では,酵母無細胞タンパク質合成系を元にしてサイトゾル中のSsaタンパク質の量を制御できる実験系の開発を行なった.まず,Ssa1タンパク質のC末端部分に(His)_6タグを導入した組み替えタンパク質(Ssa1-Hisp)のみをSsaタンパク質として発現している酵母株より,Moldaveらの方法に従って無細胞タンパク質合成用の酵母ライセ-トを調製した.次に,(His)_6タグに対するアフィニティーカラムであるニッケルレジンカラムを用いて,この酵母ライセ-トからSsaタンパク質を除去する条件の検討を行なった.その結果,タンパク質合成能を保持した状態でライセ-ト中のSsaタンパク質の85%を除去することができた.Ssaタンパク質を除去した酵母ライセ-トを用いてミトコンドリアタンパク質前駆体(pCOXIV-DHFR,F1β前駆体)を合成し,単離ミトコンドリアへの輸送実験を行なったところ,これらは共に,Ssaタンパク質除去前のライセ-トを用いて合成した場合と同程度の輸送効率でミトコンドリアに取り込まれた.抗Ssaタンパク質抗体はこれら前駆体の単離ミトコンドリアへの輸送を阻害したので,Ssaタンパク質は前駆体のミトコンドリアへの輸送に必要であることが示唆される.そこでこれはSsaタンパク質の除去が不十分であったためではないかと考えられる.現在,誘導可能なプロモーターであるGAL1プロモーターによるSSA1-His遺伝子の発現制御と組み合わせて,Ssaタンパク質の除去効率の改善を行なっている.Ssaタンパク質の活性はパートナータンパク質であるYdj1pによって制御されている.パートナータンパク質の側からSsaタンパク質の活性制御を行なうため,YDJ1遺伝子破壊株から酵母ライセ-トを調製した.このライセ-トを用いて合成した前駆体タンパク質の性質についても,現在解析を進めている.

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科研奖励(0)

会议论文

佐藤健: "Membrane protein retrieval from the Golgi apparatus to the endoplasmic reticulum(ER):characterization of the RER1 gene product as a component involved in ER localization of Sec12p" Molecular Biology of the Cell. 6. 1459-1477 (1995)

Ken Sato：“从高尔基体到内质网 (ER) 的膜蛋白回收：RER1 基因产物作为参与 Sec12p ER 定位的成分的表征”《细胞分子生物学》6. 1459-1477 (1995)。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

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