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病原性大腸菌毒素Stxによる腎水チャンネル(アクアポリン)障害検査法の開発

致病性大肠杆菌毒素Stx引起的肾水通道（水通道蛋白）损伤检测方法的建立

基本信息

批准号：
12877390
负责人：
三輪匡男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

病原性大腸菌(0157)に感染した幼児が発症する急性、慢性中毒症状が、この大腸菌が産生するShiga-like toxin(Stx)によることが知られている。その毒性発現の詳細は未だ不明な点が多く、乳幼児で高頻度に発症する腎機能障害を主徴とする溶血性尿毒症症候群(HUS)は病態進行が急激であることから、生体の毒素曝露状況の早期判定を可能とする検査法の開発が待望されている。報告者らは幼若動物(ラット、マウス)で毒素(Stx)曝露早期に尿排泄量の増加することを見いだし、この多尿の原因が尿細管、集合管に分布する水再吸収機構(アクアポリン、AQP)のStxによる障害であることを初めて明らかにした(業績1)。これらの知見から患者尿中のAQP抗体反応性物質検査がHUS発症の早期予知に有用であると考え、臨床現場で簡便に利用しできる測定法として免疫クロマト法の開発を目指した。水チャンネルAQP2の合成C末端15残基ペプチドを用いて免疫したウサギから得た抗AQP2ポリクローナル抗体と、Balb/cマウス脾内に免疫し、この脾細胞を常法に従いミエローマ細胞と融合・選択した抗体産生株より得た単クローン抗体とを組み合わせ、免疫クロマト用展開支持体としてニトロセルロース膜を用い金コロイド標識anti-AQP2モノクローナル抗体と検体混合液を免疫クロマト用試験片の試料吸収部位に添付し展開する試験片を作製した。その結果、anti-AQP2ポリクローナル抗体を塗布した部位とanti-AQP2モノクローナル抗体を塗布した部位に金コロイドのバンドが認められ、尿中のAQP2を免疫クロマト法により検出できることを確認した。今回の試作試験片は、重度の腎障害が起きた時期の尿中AQP2を検出することが可能であったが、HUS患者の病態進行の指標となりうるのかさらに検討中である。

Pathogenic Escherichia coli (0157) infection, acute and chronic poisoning symptoms, and the production of Shiga-like toxin(Stx). Details of toxicity development are unclear, high frequency of development in infants, main features of renal dysfunction, and development of a possible early detection method for the development of pathologically progressive hemolytic uremic syndrome (HUS). Report: Increase in urinary excretion of toxins (Stx) during early exposure in young animals, causes of polyuria, distribution in urine tubules and manifolds, and impairment of Stx by water reuptake mechanisms (AQP)(Performance 1). The detection of AQP antibody in urine is useful for early detection of HUS, and simple to use in clinical field. The synthetic C-terminal 15 residues of AQP2 were selected from the group consisting of anti-AQP2 antibodies, Balb/c antibodies, and spleen cells. Preparation of the test piece by adding the test piece to the sample absorption site of the test piece for immunization with the development support for immunization and the preparation of the test piece with the development support for immunization and the preparation of the test piece with the anti-AQP2 antibody mixture As a result, it was confirmed that gold coins were found in the areas coated with anti-AQP2 polyclonal antibody and the areas coated with anti-AQP2 monoclonal antibody, and AQP2 in urine was detected by immunotherapy. This time, the test film was used to detect AQP2 in urine during the period of onset of severe renal impairment.