構造生物学研究へのゲノムリソース活用促進技術の開発

开发技术以促进基因组资源用于结构生物学研究

• 批准号: 13014207
• 负责人: 太田 一寿
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014207/
• 关键词: 2ハイブリッド; 出芽酵母

ゲノム解析計画によってもたらされた様々なリソースはバイオサイエンスの進展を支える貴重なインフラストラクチュアと位置付けることが出来る。これらのゲノムリソースと構造生物学的研究を橋渡しするような効率的基盤技術の開発が重要になるとの認識の下に今年度は以下の2つの技術の開発と拡張改良に取り組んできた。(1)完全長cDNAクローンからORFをPCR増幅に晒すことなく任意の発現ベクターに移すORFリトリーバル技術長鎖cDNAを用いた発現ベクターの構築は労力と時間を要する工程である。ORFのみをcDNAクローンから取り出すにはPCRによる増幅が避けられず、それが長い断片であるが故に変異が入り易いという困難を抱えている。そこで、我々は酵母の相同組み換え能を利用してdonorプラスミドからORFを全くPCR増幅に晒すことなくacceptorベクターにトランスファーする「ORFリトリーバル法」の確立を行った。結果として5kbp以上のDNA断片をミューテーションフリーでベクターに組み込む事に成功した。(2)部分タンパク質ライブラリーを用いた2ハイブリッドフットプリント法による相互作用領域の同定我々は前年度の本特定領域における研究でランダムに作製した部分タンパク質ライブラリーから目的に合致したものを選択するという逆転の発想に基づく相互作用マッピング法である「2ハイブリッドフットブリント法」とそれを可能にするdeletionby recombinationDBR)法による部分タンパク質ライブラリー作製法とを開発した。この成果に基づき本年度はこれを更に至適化し、マッピングの精度を上げる事を目指し、実用化レベルまで漕ぎ着けた。現在、出芽酵母網羅的相互作用解析データに対しての応用を検討している。

ゲノムANALYSIS PLANSの Progress を Branch え る Precious な イ ン フラ ス ト ラ ク チ ュ ア と position pay け る こ と が come out る.これらのゲノムリソースと Research on Structural Biology を bridge crossing しするようなEfficient Basic Technology の开発がImportant knowledge and understanding of this year's following 2 technologies will be improved and improved. (1)Full-length cDNA ORF PCR amplification and PCR amplification RF リトリーバル technology long-lock cDNA is used to construct and construct the は労力 and time するengineering である. ORFのみをcDNAクローンからtake outすにはPCRによるamplificationがavoidけられず, それが长い片piece であるが therefore に変different が入りEASY いというDIFFICULT をhold えている. The same group of そこで, I々はyeastのみchangeえcanをutilizeしてdonorプラスミドからORFをfullくPCR amplificationに日すことなくベクターにトランスファーする「ORF リトリーバル method」のestablishmentを行った. As a result, the group of DNA fragments of more than 5 kbp was successfully assembled. (2) Partial タンパク性ライブラリーを Use いた2ハイブリッドフットプリント法によるThe quality of the research and production of this specific field in the previous year was determined by the same field.ライブラリーからpurposeに合之したものを选択するという inverse転の発思にbasedづくinteractionマッピング法である「2ハイブリッドフットブリント法」とそれをpossibleにするdeletionby recombinationDBR) method is used to make part of the original material.このachievements of this year's はこれをに to adapt to the し, マッピングの precision を上げる事を Eye refers to し, 実用化レベルまで漕ぎ与けた. Now, the interaction analysis of budding yeast snares is carried out.

项目成果

H.Kubota: "Budding yeast GCN1 binds the GI domain to activate the eIF2α kinase GCN2"The Journal of Biological Chemistry. 276. 17591-17596 (2001)

H. Kubota：“芽殖酵母 GCN1 结合 GI 结构域以激活 eIF2α 激酶 GCN2”《生物化学杂志》276. 17591-17596 (2001)。