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ポリユビキチン化基質蛋白質の網羅的同定

多泛素化底物蛋白的综合鉴定

基本信息

批准号：
15790148
负责人：
太田一寿
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo (2004)Kanazawa University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790148/
关键词：
出芽酵母ユビキチン化プロテオミクスユビキチン MS

项目摘要

蛋白質のユビキチン化は、プロテアソームによる分解や、エンドサイトーシスなどの様々な生命現象を調節する重要な翻訳後修飾の一つである。従来のユビキチン化基質の同定は場当たり的で、サイクリンなどの一部の蛋白質群に集中していたが、近年、出芽酵母を用いた網羅的基質同定の結果が海外の研究グループより報告され、プロテオミクス解析へとそのフィールドを移した感がある。そこで、我々も、以前から開発してきたユビキチン化基質蛋白質の網羅的検出システムの独自性をアピールするとともに、その基質プロファイリングへの応用を試みた。<実験結果>昨年度に引き続き、ポリユビキチン化蛋白質を優先的に濃縮できる「パラレルタグ(PAP)法」の改良・応用を行ってきた。PAP法とは我々が独自に考案した方法で、それぞれが異なるタグで標識されたユビキチンを同時に発現させてポリユビキンチン鎖に2種類のタグを取り込ませ、次にそれぞれのタグに対するアフィニティ精製を連続して行うシステムである。これにより、ポリユビキチン化蛋白質を選択的、高純度に精製する事が可能となる。実際に、PAP法で得られたサンプルをLC/MS/MSで解析したところ、既知のものを含め130種以上の基質蛋白質候補が同定された。そこでそのうち新規のものに個別に検討を加えたところ、約80%程度においてユビキチン化が確認され、中には刺激によるユビキチン化の程度に変動が認められたものもあった。また、基質プロファイリングへの第一歩として、F-box蛋白質:MET30p過剰発現下での基質蛋白質:MET4pのPAP法による濃縮状況を調べたところ、MET30p依存的なユビキチン化MET4p収量の増減を認め、網羅的プロファイリングへの応用が可能であると判断した。

Protein transformation, protein breakdown, protein metabolism, protein In recent years, the concentration of some protein groups in the same field of culture substrate has been studied. In recent years, the results of matrix identification of budding yeast have been reported in overseas studies. In the past, we have developed a network of matrix proteins that are independent of each other and that are used in the development of matrix proteins <Results> Last year's introduction of the first batch of protein, the second batch of protein, the third batch of protein, the fourth batch of protein, the fourth batch of protein, the The PAP method is based on the method of identifying and identifying the two types of files at the same time. It is possible to select and purify high-purity proteins. At present, PAP method can be used to analyze more than 130 matrix protein candidates. For example, if you want to change your mind, you can change your mind. The first step in the development of matrix proteins: MET30p, F-box proteins: MET4p, PAP method, concentration status, MET30p-dependent, MET4p, increase and decrease in the amount of MET30p, F-box proteins, MET30p, and MET30p-dependent, MET4p, F-box proteins.