転写制御タンパク質機能ドメインの大量発現および高次構造解析

转录调节蛋白功能域的大规模表达和构象分析

• 批准号: 13014203
• 负责人: 菊池 康夫
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014203/
• 关键词: 転写因子; DNA結合タンパク質

本研究では外界シグナルに応じて遺伝子の発現調節をおこなう転写制御タンパク質機能の特徴ある機能ドメインの構造解析をめざすと同時に新たな情報伝達因子の探索、機能解析を通じて遺伝子発現制御の機構を解明することを目的とする。1 BTEBのDNA結合ドメインの高次構造解析薬物代謝酵素CP1A1遺伝子の構成的転写調節配列BTEに結合するBTEBのDNA結合ドメインはC2H2型Zn-フィンガーモチーフとそのN端に隣接する塩基性領域も含む。このドメインの13-C、15-N二重ラベル体を大量調製し稲垣冬彦教授(北大)のご幸力でNMRスペクトルを解析し、精密化を行った。さらにDNA複複合体形成を確認しその至適化をおこなった。2 共発現法によるPASドメイン二量体の大量発現CYP1A1遺伝子の誘導的転写調節配列XRE配列には受容体型転写因子AhRとArntのヘテロ二量体が結合する。両者のDNA結合ドメインにはbHLHとPASモチーフがある。PAS領域は大腸菌で発現させると大部分が不溶性タンパク質のなるのでAhRとArntを大腸菌で共発現させたところタンパク質の溶解性は格段に向上し強いXRE配列結合活性をもつヘテロ二量体が生成した。この二量体をAhR-Arnt-XRE三成分複合体とし大量精製する方法を確立した。またヘテロ二量体のDNA(XRE配列)結合体の解離定数を10nMと決定した。(発表準備中)。3 薬物代謝酵素CYP1A2の発現調節CYP1A2の発現はCYP1A1と同様にAhR/Arntヘテロ二量体が必要であるが遺伝子の発現調節領域に直接結合する因子は未知であった。マウス肝臓からこの因子を精製し、LBP-1と同定した。また、LBP-1とAhR、Arntとの協調によるCYPIA2の発現調節モデルを明らかにした。(発表準備中)4 低酸素シグナルにおよぼすNOの役割低酸素状態における血管新生やがん組織の増殖に関わるHIFの成分HIF1-αはbHLH-PASドメインを持つ転写因子である。HIF1-αのPro(564)をO2依存的に水酸化するProlyl HydroxylaseはNO(Nitric oxide)によって低酸素状態でも酵活性が上昇しHIF1-αの活性化を抑えることを見いだした(発表準備中)

This study で は outside シ グ ナ ル に 応 じ て posthumous son 伝 の 発 now adjust を お こ な う planning write suppression タ ン パ ク の quality function, 徴 あ る function ド メ イ ン の structure を め ざ す と and に new た 伝 な intelligence of factor の exploration, function analytical を じ て posthumous son 伝 発 now suppression の institutions を interpret す る こ と を purpose と す る. 1 BTEB の dna-binding ド メ イ ン の higher order structure 薬 traces of material metabolism enzyme CP1A1 伝 son の form of planning write tuning BTE に combining す る BTEB の dna-binding ド メ イ ン は type C2H2 zinc - フ ィ ン ガ ー モ チ ー フ と そ の n-terminal に 隣 meet す る も contain む salt basic areas. こ の ド メ イ ン の - 13 C and 15 N double ラ ベ ル body を large modulation し 稲 through winter (Peking University), professor の ご luckily force で NMR ス ペ ク ト ル を parsing し, motors を っ た. The formation of さらにDNA complex を confirms that <s:1> そ <s:1> is adapted to をお なった なった なった. 2 total 発 method に よ る PAS ド メ イ ン 2 quantity body の large 発 now CYP1A1 heritage 伝 son の induction of planning write adjustment with column XRE に は by capacity planning write size factor AhR と Arnt の ヘ テ ロ 2 quantity body が combining す る. The two have their DNA bound to ドメ に に <s:1> bHLHとPASモチ モチ フがある フがある フがある. PAS field は coliform で 発 now さ せ る と most が insoluble タ ン パ ク qualitative の な る の で AhR と Arnt を coliform で 発 now total さ せ た と こ ろ タ ン パ ク qualitative の solubility は lattice period of strong に upward し い XRE match column binding activity を も つ ヘ テ ロ 2 quantity body が generated し た. The <s:1> <s:1> diplast をAhR-Arnt-XRE three-component complex と <s:1> large-scale refining する method を established <s:1> た. The <s:1> dissociation determination of the またヘテロ diplome <s:1> DNA(XRE coordination) conjugate を10nMと determines the た た. (Preparation for the schedule). 3 this CYP1A2 薬 content metabolic enzyme の 発 now adjust this CYP1A2 の 発 now は CYP1A1 と with others に AhR/Arnt ヘ テ ロ 2 quantity body が necessary で あ る が heritage 伝 son の 発 に now adjust field directly combined す る unknown factor は で あ っ た. Youdaoplaceholder0 ウス liver ら ら ら <s:1> <s:1> を factor を refined <s:1> LBP-1と fixed <s:1> た. ま た, LBP - 1 と AhR, Arnt と の coordination に よ る CYPIA2 の 発 now adjust モ デ ル を Ming ら か に し た. Low acid (発) in table ready to 4 element シ グ ナ ル に お よ ぼ す NO cut low acid の service element state に お け る angiogenesis や が ん organization の raised colonization に masato わ る HIF の composition HIF1 alpha は bHLH - PAS ド メ イ ン を hold つ planning write factor で あ る. HIF1 alpha の Pro (564) を O2 dependent に water acidification す る Prolyl Hydroxylase は NO (Nitric oxide) に よ っ て low acid element state で も yeast activity が rise し HIF1 alpha の activeness を え suppression る こ と を see い だ し た (発 table ready to)