不死化細胞を用いた精巣機能の再構築と内分泌攪乱物質の毒性メカニズムの解析

永生化细胞重建睾丸功能及内分泌干扰物毒性机制分析

• 批准号: 13027230
• 负责人: 田渕 圭章
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027230/
• 关键词: 温度感受性SV40大型T抗原; トランスジェニックマウス; ライディッヒ細胞; セルトリ細胞; DNAマイクロアレイ; 内分泌攪乱物質; ビスフェノールA; 細胞死

温度感受性SV40大型T抗原遺伝子導入トランスジェニックマウス由来のセルトリやライディッヒ細胞の樹立と性質解明を行なった.また,樹立細胞を用いて内分泌攪乱物質(ビスフェノールA)に反応する遺伝子を明らかにした.1.細胞株樹立と機能解析 温度感受性SV40大型T抗原遺伝子導入トランスジェニックマウスからセルトリ(TTE3)およびライディッヒ(TTE1)細胞株の樹立に成功した,両細胞は,T抗原に依存した温度感受性増殖を示した,TTE3細胞は,細胞特異的なマーカーであるFSH受容体,SGP-2のmRNAを発現し,細胞間にはタイトジャンクションの構成タンパク質ZO-1を発現した.TTE1細胞は,ステロイド合成酵素のmRNAを発現し,アルカリホスファターゼ活性を有した.これら細胞は,細胞特異的な機能を有しているので精巣細胞モデルとして有用であることが明らかとなったT細胞の分化・増殖停止に関連する遺伝子群をDNAマイクロアレイを用いて解析した.TTE3の細胞増殖停止時には約30個の遺伝子発現が変動した.p21wafl/cip1の遺伝子の上昇は定量的RT-PCRで確認できた.また,TTE1細胞の分化に関連して約30個の遺伝子の変動を明かにした.変動した遺伝子の中にはガラニン受容体や亜鉛輸送体が存在した.2.内分泌攪刮物質の作用の検討TTE3細胞において高濃度200μMのビスフェノールAは濃度依存的に細胞死を誘導した.マイクロアレイを用いてこの条件で変化する遺伝子を調べた結果,15個の遺伝子が変動することが明らかとなった.それらの遺伝子の中でiNOS, chop-10遺伝子が増加し,estrogen受容体1が減少することを定量的RT-PCRで確認した.

The introduction of temperature sensitive SV40 large T antigen gene into cells and its origin, establishment and characterization The endocrine disruptors that build cells are used in the process. 1. Cell line establishment and functional analysis Temperature sensitive SV40 large T antigen gene introduction (TTE3) Temperature sensitive SV40 large T antigen gene introduction (TTE1) Cell line establishment and functional analysis Temperature sensitive SV40 large T antigen gene introduction (TTE3) Temperature sensitive SV40 large T antigen gene introduction (TTE3) Cell specific FSH receptor,SGP-2 mRNA expression, intercellular cell protein composition, ZO-1 expression. TTE1 cells respond to FSH synthase mRNA expression, cell protein activity. TTE3 cells have cell-specific functions, and sperm cells are useful. TTE3 cells are identified by quantitative RT-PCR analysis of DNA fragments associated with T cell differentiation and growth arrest. About 30 DNA fragments are detected when TTE3 cells stop growing. TTE-1 cell differentiation is related to the movement of about 30 genes. 2. The effect of endocrine disruptors on TTE3 cells at high concentrations of 200μM was induced by concentration-dependent apoptosis. The results of the adjustment were as follows: In addition, iNOS, chop-10 gene increased, and estrogen receptor 1 decreased.

项目成果

Tabuchi, Y.et al.(7 authors): "Development of a conditionally immortalized testicular Sertoli cell line TTE3 expressing sertoli cell-specific genes from mice transgenic for temperature sensitive simian virus 40 large T-antigen gene"J.Urol.. 167. 1538-1545

Tabuchi, Y. 等人（7 位作者）：“从转基因温度敏感猿病毒 40 大 T 抗原基因的小鼠中开发表达支持细胞特异性基因的条件永生化睾丸支持细胞系 TTE3”J.Urol.. 167

Ohta, S.et al.(6 authors): "Establishment of ALeydig Cell Line, TTE1, from Transgenic Mice Harboring Temperature-Sensitive Simian Virus 40 Large T-Antigen Gene"Arch.Androl.. 48. 43-51 (2002)

Ohta，S.等人（6 位作者）：“从携带温度敏感猿病毒 40 大 T 抗原基因的转基因小鼠建立 ALeydig 细胞系 TTE1”Arch.Androl.. 48. 43-51 (2002)

Ohta, S.et al.(3 authors): "DNA microarray analysis of genes involved in the process of differentiation in mouse Leydig cell line TTE1"Arch.Andorol.. 48. 208-211 (2002)

Ohta, S.et al.（3 位作者）：“小鼠 Leydig 细胞系 TTE1 分化过程中涉及的基因的 DNA 微阵列分析”Arch.Andorol.. 48. 208-211 (2002)