タンパクアレイを指向した新規タンパク固定化センサを用いるタンパク機能評価システム

使用面向蛋白质阵列的新型蛋白质固定传感器的蛋白质功能评估系统

• 批准号: 13202051
• 负责人: 片山 佳樹
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202051/
• 关键词: プロテオーム; タンパク; バイオセンサ; タンパク間相互作用; 遺伝子機能解析; 蛍光分子プローブ; バイオチップ; 機能ゲノム

本研究では、ゲノム機能解析で重要な種々のタンパクの機能評価のための実用的タンパク固定化チップを実現するためのタンパク固定化センサーの開発と機能評価システムの基礎検討を目的とした。まず、タンパクを金電極上に固定化するために、末端ジスルフィド型NTA誘導体を開発し、これを金表面に修飾してニッケル錯体とした。これに、エストロゲンレセプターのリガンド結合ドメインにヒスチジンタグを付加したものを大腸菌で発現して修飾を試みたところ、レドックスマーカーとして、フェロシアン化物イオンを用いたサイクリックボルタンメトリーによる検討から、エストロゲンの濃度依存的応答が見られ、タンパクの活性を維持したまま良好に固定化できることが分かった。このセンサーは、エストロゲンのほかにも各種アゴニストと結合定数に依存して応答を示した。これに対し、アンタゴニストでは異なる応答を示し、両者を見分けられる可能性が示された。また、ヒスチジンタグを有するタンパクを検出できる蛍光分子プローブとして、NTA型フルオレセイン誘導体も開発した。ナイロンメンブレンを用いた検討で、10ngレベルのタンパクが検出可能であることが、ヒスチジンタグを付加して発現させた転写因子であるPOUドメインを用いて示された。また、これとは別に、電極活性なフェロセンを有するNTA誘導体型プローブも合成に成功した。以上の成果により、タンパク間相互作用やタンパク-リガンド相互作用を、電気化学や蛍光により簡便に検出できるシステムの基本的概念が確立できた。

This study で は, ゲ ノ ム function analytical で important な kind 々 の タ ン パ ク の function evaluation 価 の た め の be used タ ン パ ク immobilized チ ッ プ を be presently す る た め の タ ン パ ク immobilized セ ン サ ー の open 発 と function evaluation 価 シ ス テ ム の beg を purpose based 検 と し た. ま ず, タ ン パ ク を に immobilized on gold electrode す る た め に, end ジ ス ル フ ィ ド type NTA induced body を 発 し, こ れ に を gold surface modification し て ニ ッ ケ ル misprinted と し た. こ れ に, エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー の リ ガ ン ド combining ド メ イ ン に ヒ ス チ ジ ン タ グ を plus し た も の を coliform で 発 now し て modified を try み た と こ ろ, レ ド ッ ク ス マ ー カ ー と し て, フ ェ ロ シ ア ン compound イ オ ン を with い た サ イ ク リ ッ ク ボ ル タ ン メ ト リ ー に よ る 検 please か ら, エ ス ト ロ ゲ ン の concentration Save 応 answer が see ら れ, タ ン パ ク の active を support し た ま ま good に immobilized で き る こ と が points か っ た. こ の セ ン サ ー は, エ ス ト ロ ゲ ン の ほ か に も various ア ゴ ニ ス ト と combined with destiny に dependent し て 応 answer を shown し た. こ れ に し, seaborne ア ン タ ゴ ニ ス ト で は different な る 応 answer を し, who struck を see points け ら れ が る possibility in さ れ た. ま た, ヒ ス チ ジ ン タ グ を have す る タ ン パ ク を 検 out で き る 蛍 light molecular プ ロ ー ブ と し て, NTA フ ル オ レ セ イ ン inductor も open 発 し た. ナ イ ロ ン メ ン ブ レ ン を with い た beg で 検, 10 ng レ ベ ル の タ ン パ ク が 検 makes possible で あ る こ と が, ヒ ス チ ジ ン タ グ を plus し て 発 now さ せ た planning write factor で あ る POU ド メ イ ン を with い て in さ れ た. ま た, こ れ と は don't に, electrode active な フ ェ ロ セ ン を have す る NTA induced shape プ ロ ー ブ も synthetic に successful し た. All above の に よ り, タ ン パ ク interaction between や タ ン パ ク - リ ガ ン ド chemical を, electric 気 や 蛍 light に よ り simple に 検 out で き る シ ス テ ム が の basic concept established で き た.

项目成果

村田 正治: "A Novel Biosensor for The Rapid Measurement of Estrogen Based on Ligand-receptor Interaction"Analytical Sciences. 17. 387-390 (2001)

Masaharu Murata：“一种基于配体-受体相互作用快速测量雌激素的新型生物传感器”分析科学。17. 387-390 (2001)

片山 佳樹: "A New Fluorescent Reagent for Highthrough Put Screening of Protein Interaction"Analytical Sciences. (印刷中). (2002)

Yoshiki Katayama：“用于蛋白质相互作用高通量筛选的新型荧光试剂”分析科学（2002 年出版）。

村田 正治: "Bioaffinity sensor for endocrine disruptor using receptor-modified Au electrode"Analytical Sciences. (印刷中). (2002)

Masaharu Murata：“使用受体修饰金电极的内分泌干扰物生物亲和力传感器”分析科学（2002 年）。