線虫転写因子群の系統的遺伝子破壊株を用いた網羅的ゲノム機能解析

使用线虫转录因子的系统基因破坏菌株进行全面的基因组功能分析

基本信息

批准号：
13202061
负责人：
三谷昌平
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202061/
关键词：
線虫転写因子遺伝子破壊株ゲノム機能解析

项目摘要

線虫C.elegansは、遺伝子構造解析がもっとも進んでいる多細胞モデル生物の1つである。また、飼育、保存が極めて容易であって遺伝学的解析に適しており、形態や細胞系譜の記載が充実していることから、各々の遺伝子がどのように生体内で機能しているかを知る上で有用である。我々は、従来法に比べて2桁程度高効率である、遺伝子ノックアウト法の開発に成功した(Gengyo-Ando ＆ Mitani,2000)。この手法を用いて、転写因子遺伝子群の系統的な遺伝子ノックアウト株(欠失変異体)を分離し、個体の発生や環境適応等の局面で各々の遺伝子制御の鳥瞰的な理解を進めることを目指している。過去1年間で新たに分離できた欠失変異体は135遺伝子であった。分離速度についてはさらなる努力を必要とするが、得られた特に興味深い変異体を用いた機能解析は着実に進行しており、本来の「機能解析」という目的としては内容が濃いものになりつつある。「約20%の致死または不妊を呈する株のバランサ処理に時間がかかる」という問題点については、「パーティクルガンを用いて、レスキューDNAを導入した安定トランスジェニック株を容易に分離する手法」の確立に成功したことから、これを致死株と交配することにより解決に向かっている。今後、本来の変異体分離速度の向上が期待される。また、単一コピー染色体挿入トランスジェニック株の分離のための遺伝的選択条件となり得る変異体を用いて安定トランスジェニック株の分離がルーチン化できた。

秀丽隐杆线虫是用于遗传结构分析的最先进的多细胞模型生物之一。此外，它非常容易升高和保存，适合遗传分析，并且对形态和细胞谱系具有全面的描述，这对于学习每个基因在体内的功能如何有用。我们成功地开发了一种基因敲除方法，该方法比常规方法高约两个数量级（Gengyo-Ando＆Mitani，2000）。我们旨在隔离转录因子基因组的系统基因敲除菌株（缺失突变体），并在诸如个体发育和环境适应等情况下促进对每个基因调节的鸟眼的理解。在过去一年中可以隔离的新缺失突变体是135个基因。尽管分离率需要进一步的努力，但是使用所获得的特别有趣的突变体的功能分析正在稳步发展，而“功能分析”的最初目的正变得越来越激烈。关于“平衡菌株表现出约20％致死或不育的菌株”的问题，我们已经成功建立了一种使用粒子枪来易于分离引入救援DNA的稳定转基因菌株的方法，这导致了解决方案，这导致了解决方案，通过将它们与致死菌株交配，预计原始的突然分离速度可以在未来的表现中得到改善。使用可以用作遗传选择标准的突变体，用于分离单拷贝染色体插入转基因菌株。