テロメア・テロメレースの腫瘍生物学的意義と抗テロメレース薬の探索

端粒和端粒酶的肿瘤生物学意义及抗端粒酶药物的寻找

• 批准号: 13218124
• 负责人: 山田 尚
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218124/
• 关键词: テロメア; テロメレース; アポトーシス; DNA損傷; 遺伝子発現; DNAチップ; 抗生物質

(1)慢性骨髄性白血病の急性転化に由来するK562細胞にテロメレースの触媒活性を有するhTERTを導入したK562/hTERTを作成し、腫瘍生物学的な検討を加えた。K562/hTERTは親株に比べ3倍以上のテロメア長を有していた。また、hTERTの転写はc-Mycに依存しているので、K562にc-Mycを導入したK562/c-Mycに関しても検討した。etoposide,Ara-C,hydroxyurea,血清除去培地、X線照射にて各株細胞の感受性を検討した。K562/hTERTは親株やK562/c-Mycに比べて、血清除去、X線照射、etoposideによるアポトーシスの誘導に対しては強い抵抗性を示したがAra-C,hydroxyureaに対しては親株やK562/c-Mycと同等の感受性を示した。これらの結果より,テロメレース活性の増強、もしくはテロメア長の延長が細胞障害、とりわけ二重鎖DNA障害に伴うアポトーシスの抵抗性に関連を有することが示唆された。(2)K562/hTERTの2株と親株を用いてDNA arrayによる12000遺伝子の発現パターンを網羅的に解析した。K562/hTERTで共通に2倍以上の発現増加を認める遺伝子は15であった。さらに、各株細胞において全てに発現が認められ、且つ親株がK562/hTERT細胞より2倍以上の発現を認めた遺伝子は32であった。これらの遺伝子のうち、一部は染色体上での位置が判明していた。しかし、それらの多くは、テロメア近傍の遺伝子ではなかった。(3)細菌培養上清よりテロメレースの阻害物質の探索を行った。TRAP法を一部改変しDNAシーケンサーを用いて、抑制率を数値化して表せる系で実験を行った。HIV逆転写酵素の阻害活性を有する検体を含め、現在までに4000種類の培養上清を検討したがテロメレース活性を抑制できる検体は認められていない。

(1)K562/hTERT is introduced into the cell line to investigate the origin of acute leukemia. K562/hTERT is more than 3 times longer than its parent plant. HTERT is a c-Myc dependency, K562 is a c-Myc import, K562/c-Myc is a c-Myc dependency. Etoposide,Ara-C,hydroxyurea, serum removal culture, X-ray irradiation on the sensitivity of each strain of cells to investigate. K562/hTERT showed strong resistance to antiserum, serum depletion, X-ray irradiation, and etoposide induction, but Ara-C,hydroxyurea showed similar susceptibility to K562/c-Myc. The results showed that there was a correlation between increased activity, prolonged cell damage, and resistance to double-locked DNA damage. (2) The analysis of 2 strains of K562/hTERT using DNA array and 12000 genes. K562/hTERT is more than 2 times more common than K562/hTERT In addition, each cell line is fully recognized, and the parent line is more than twice as large as the K562/hTERT cell line. The position of a chromosome is determined. There's a lot of stuff going on around here, and there's a lot of stuff going on. (3)A Study on the Inhibitory Substances in Bacterial Culture Supernatants The TRAP method is a partial modification of the DNA profile, and the inhibition rate is a numerical modification of the DNA profile. HIV reverse transcription enzyme inhibition activity is present in 4000 species of culture supernatant.

项目成果

Akiyama M, 他。: "Telomerase Overexpression in K562 leukemia cells protects against apoptosis by serum deprivation and double-stranded DNA break inducing agents, but not against DNA synthesis inhibitors"Cancer Lett.. 178. 187-197 (2002)

秋山 M 等。

Tsuboi N, 他。: "Ganglioside as an endogenous growth suppressor for glomerular mesangial cells"Kidney Int.. 60(4). 1378-1385 (2001)

坪井 N 等人。

Kawano T, 他。: "Lack of BCL10 mRNA mutation in lymphoid malignancies"Anticancer Res.. (In press).

河野T等人。