HIV-1VifによるHIV-1の感染性制御機構に関する研究

HIV-1Vif控制HIV-1感染性的机制研究

• 批准号: 13226052
• 负责人: 高折 晃史
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226052/
• 关键词: HIV-1; Vif; 感染性

本研究の目的は、Vifと結合し機能する宿主側の細胞性因子、およびVifにより感染細胞に引き起こされるシグナル伝達経路を分子生物学的手法を用いて同定することであるが、本年度は、主にその同定手段のための系の確立に費やされた。「今年度の成果」は1)蛋白精製の手法によるVif結合蛋白質の同定を行う目的で、野生型Vif、機能を温存した変異体M27、機能を欠如した変異体M29,Δ12、をキナーゼによる燐酸化部位を有するGST融合蛋白発現ベクター(GST2TK)に組み込み、GST融合蛋白を作製した。これらをnon-permissive cellであるH9細胞の蛋白抽出液と反応させた後、GSTの沈降を行い、共沈した蛋白質を二次元電気泳動して、異なる泳動パターンを確認中である。2)DNA array等のトランスクリプトーム、及びプロテオーム解析を用いたVifにより誘導されるシグナルの同定を目標として、Vifのnon-permissive cellであるH9細胞に、テトラサイクリン誘導システムを用いてVifを誘導発現できる細胞株の樹立を試みている。現在、H9 Tet off cell lineを樹立した。3)Vifのnon-permissive cellであるH9細胞を用いた簡便なアッセイ系を樹立するため、ルシフェラーゼをレポーター遺伝子として組み込んだreplication competentなmolecular cloneであるpNL43 Δvif/Lucを作製し感染性を簡便にチェックするシステムを樹立した。

The aim of this study is to establish the molecular biology approach to the identification of host-side cytokines, Vif, vi "Achievements of this year": 1) Protein purification method: Vif binding protein identity, wild-type Vif, functional variant M27, functional variant M29,Δ12, phosphorylation site, GST fusion protein development (GST2TK), GST fusion protein production. The protein extract of H9 cells was identified by non-permissive cell chromatography, GST sedimentation, protein co-precipitation and two-dimensional electromigration. 2)DNA array and other types of gene expression and gene expression analysis are used in the establishment of cell lines in H9 cells and non-permissive cells. H9 Tet off cell line 3)Vif's non-permissive cell is used to establish a simple replication competent molecular clone. pNL43 Δvif/Luc is used to control infectivity.