センサーキナーゼに共通する制御機構の研究

传感器激酶共同调控机制的研究

• 批准号: 13780517
• 负责人: 宮武 秀行
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780517/
• 关键词: センサーキナーゼ; レスポンスレギュレータ; 2成分系; 結晶構造; 転写制御因子

高度好熱菌(Thermas thermophilus HB8)のゲノムデータベースから、センサーキナーゼ・レスポンスレギュレータ遺伝子を検索した結果、原核生物の浸透圧センサーとして知られているEnvZおよび、それに対応するレスポンスレギュレータである、OmpRを同定することができた。EnvZ遺伝子を増幅し、pET systemに再構築した。宿主はBL21(DE3)を用い、30L培養装置を使って、形質転換した大腸菌を大量培養した。EnvZは不溶性画分に発現したが、β-D-octylglucopyranosideを用いて可溶化・精製に成功した。これを用いて単結晶の調製を試みたところ、低分解能(口8Å)ではあるが、回折点を与えることが分かった。これは、膜貫通部位・2量体形成部位・自己リン酸化部位のすべてを含むセンサーキナーゼ全長の、初めての単結晶である。現在、より高分解能な回折点を与える単結晶の調製条件を検索中である。この結晶構造が明らかになれば、センサーキナーゼに共通した制御機構の解明に大きく寄与すると考えられる。今後は、T.thermophilus HB8由来の他のセンサーキナーゼの発現・精製・結晶化も試みていく。一方、OmpRについては発現・精製には成功したものの、有用な単結晶の調製には至っていない。しかしながら、T.thermophilus HB8由来の、4種類のレスポンスレギュレータについて発現・精製およびそれらの単結晶を調製することに成功した。そのうち、現在までに1種類の結晶構造解析に成功し、詳細な機能解析を進めている。他の結晶構造についても、得られた構造を基にして分子置換法により解析を進めている。これらの解析が終了すれば、単一生物種が持つ複数のレスポンスレギュレータについて構造比較が可能になり、2成分系における情報伝達機構の制御様式について有用な知見が得られるだろう。

Thermas thermophilus HB8 is a highly pathogenic bacterium. The results of this study are as follows: 1. Infiltration of prokaryotes. 2. Infiltration of prokaryotes. 3. EnvZ gene amplification, pET system re-construction The host BL21(DE3) was used in a 30L culture apparatus to culture Escherichia coli in large quantities. EnvZ is insoluble and soluble in β-octylglucopyranoside. The crystal structure is composed of two parts: one part is composed of two parts, the other part is composed of two parts. The film penetration site, the volume formation site, the acid site, the initial crystallization site, the total length of the film, and the initial crystallization site. Now, the high resolution energy, the inflection point, and the modulation conditions of the crystal are in the middle of the search. The crystal structure of this kind is composed of two parts: one part is transparent, the other part is transparent, and the other part is transparent. In the future, T.thermophilus HB8 is derived from other materials, refined and crystallized. One side, OmpR, OmpR. T.thermophilus HB8 origin, 4 kinds of complex, complex The crystal structure analysis of the first type is successful, and the detailed function analysis is advanced. The crystal structure of the crystal is analyzed by molecular replacement method. The analysis of these species is based on the analysis of possible structural comparisons, the analysis of 2-component systems, the analysis of information transmission mechanisms, and the analysis of useful knowledge.