イノシトールリン脂質を介したエンドサイトーシス制御機構の解明

阐明肌醇磷脂介导的内吞控制机制

• 批准号: 13780567
• 负责人: 伊藤 俊樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780567/
• 关键词: epsin; トランスゴルジ網; クラスリン; ENTHドメイン; AP-1; イノシトールリン脂質; エンドサイトーシス; インシトールリン脂質; エンドソーム

昨年度の本研究において明らかにした、新規epsinファミリーに属するKIAA0171のさらに詳細な機能解析を行った。KIAA0171の細胞内局在は、クラスリンだけでなく、トランスゴルジ網(TGN)輸送に関与するアダプタータンパク、AP-1と一致した。また、その一部はエンドソームの融合によって生じるMVB(multi-vesicular body)構造の周縁部に沿って局在することが観察された。実際、in vitroでのpull-down assay及びoverlay assayにより、KIAA0171は一次構造中央部においてクラスリン重鎖、及びγ-adaptinと結合することが明らかとなった。さらに詳細な部分コンストラクトを作製し、検討したところ、これらの結合はそれぞれ、(1)KIAA0171の「SGDLVDLSGDLVDLGFVG」配列とクラスリン重鎖末端ドメイン、及び(2)KIAA0171の「GNGDFGDWSA」配列とγ-adaptinのearドメインとの相互作用によるものであることが明らかとなった。次に、KIAA0171の細胞内局在とENTHドメインの関係を明らかにするべく、さまざまな変異型コンストラクトをGFP融合タンパクとしてCOS7細胞内に発現し、その細胞内局在を検討した。ENTHドメインを欠損するとKIAA0171のTGN周辺への局在が観察されないことは昨年度に明らかにしていたが、脂質結合に必須の67番ArgをAlaに置換した変異体も同様に、細胞質中に分散する異常な局在パターンを示した。驚くべきことに、ENTHドメインのみをGFP融合タンパクとして発現させると単独でTGNに局在できることが観察され、その局在は67番Arg変異型ENTHドメインでは観察されなかった。

Yesterday's annual の this study に お い て Ming ら か に し た, new rules epsin フ ァ ミ リ ー に genus す る KIAA0171 の さ ら に detailed analytical line を っ な function た. Bureau in は KIAA0171 の cell, ク ラ ス リ ン だ け で な く, ト ラ ン ス ゴ ル ジ network (TGN) conveying に masato and す る ア ダ プ タ ー タ ン パ ク と consistent, AP - 1 し た. ま た, そ の a は エ ン ド ソ ー ム の fusion に よ っ て raw じ る MVB (multi - vesicular body) tectonic の week try department に along っ て bureau in す る こ と が 観 examine さ れ た. Be international, the in vitro で の pull - down assay and び overlay assay に よ り, KIAA0171 は a structure the central department に お い て ク ラ ス リ ン heavy lock, and び gamma adaptin と combining す る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に detailed part な コ ン ス ト ラ ク ト を as し, beg し 検 た と こ ろ, こ れ ら の combining は そ れ ぞ れ, (1) KIAA0171 の "SGDLVDLSGDLVDLGFVG" match column と ク ラ ス リ ン heavy lock end ド メ イ ン and び (2) KIAA0171 の "GNGDFGDWSA" match column と gamma adaptin <s:1> earドメ <s:1> と と <e:1> interaction による <s:1> である である とが とが light ら である となった となった. に, KIAA0171 の cells inside bureau in と ENTH ド メ イ ン の masato を and Ming ら か に す る べ く, さ ま ざ ま な - alien コ ン ス ト ラ ク ト を GFP fusion タ ン パ ク と し て in COS7 cells に 発 し, そ の cells inside bureau in を beg し 検 た. ENTH ド メ イ ン を owe loss す る と KIAA0171 の TGN weeks 辺 へ の bureau in が 観 examine さ れ な い こ と は yesterday annual に Ming ら か に し て い た が, lipid に must の 67 times Arg を Ala に replacement し た - variant も with others に に dispersed, the cytoplasm す る abnormal な bureau in パ タ ー ン を shown し た. Jing く べ き こ と に, ENTH ド メ イ ン の み を GFP fusion タ ン パ ク と し て 発 now さ せ る と 単 で alone the TGN に bureau in で き る こ と が 観 examine さ れ, そ の bureau in 67's は Arg - alien ENTH ド メ イ ン で は 観 examine さ れ な か っ た.

项目成果

竹縄忠臣, 伊藤俊樹: "Phosphoinositides, key molecules for regulation of actin cytoskeletal organization and membrane traffic from the plasma membrane"Biochim Biophys Acta. 1533・3. 190-206 (2001)

Tadaomi Takenawa，Toshiki Ito：“磷酸肌醇，调节肌动蛋白细胞骨架组织和膜质膜运输的关键分子”Biochim Biophys Acta 1533・3（2001）。