運動神経の軸索伸長経路の決定に関与する因子群の探索と解析

运动神经轴突生长路径决定因素的探索与分析

• 批准号: 13878158
• 负责人: 山本 融
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878158/
• 关键词: 神経発生; 神経回路; 運動神経; 神経分化; 新規因子

解析が最も進んでいるニワトリ胚を用い、四肢の腹側に投射する運動神経であるLMCm、および背側に投射するLMCIの両運動神経群の性質決定が確立した時期の同一個体の同一体節上の脊髄から細胞を分離し、こうして分離された単一の神経細胞からそれぞれcDNAを調製した。それぞれのcDNA中に含まれる運動神経マーカーの存在パターンを解析することにより、LMCm、およびLMCIに由来するcDNAをretrospectiveに同定した。ついで、suppressor PCR-mediated subtractionを単一細胞由来のcDNAに適応できるよう独自に改良した方法でsaサブトラクトし、LMCm細胞には発現しているが、LMCI細胞には発現していない因子が濃縮されているsubtracted libraryを作成した。さらに、このlibraryを用いて、LMCm細胞に選択的に発現している因子を、differential hybridizationによる一次スクリーニングとin situ hybridizationによる二次スクリーニングにより多数単離することに成功した。これら因子群は運動神経以外にも中枢神経系の特定領域に発現しており、各神経群の性格付けに重要な役割を果たしていることが予想された。また、運動神経選択的、LMCI選択的に発現する因子群が濃縮されたsubtracted libraryを作製し、小規模なスクリーニングを行った結果、期待される発現パターンを示す因子群が単離され、本研究のために開発した方法が普遍的に有効であることを確認した。

使用已经是最先进的分析的鸡胚胎，在两个运动神经组的表征LMCM的表征LMCM的表征（预测肢体的腹侧）和LMCI的同一体系的同一体细胞的脊髓中分离出来，而LMCI（向后均已建立了cDNA，并从单个神经元中建立了CDNA。通过分析每个cDNA中包含的运动神经元标记的存在模式，回顾性地鉴定出源自LMCM和LMCI的cDNA。然后，使用独特的改进方法减去减去PCR PCR介导的减法，以适应单个细胞的cDNA，并创建了减去库，该方法富集在LMCM细胞中表达的因子，但在LMCI细胞中却没有。此外，使用此库，我们成功地通过差异杂交和二次筛选通过原位杂交分离了在LMCM细胞中选择性表达的大量因素。除运动神经外，这些因素在中枢神经系统的特定区域表达，并且预计它们在表征每个神经群体方面起着重要作用。此外，我们创建了一个减去的文库，在该文库中，选择性表达运动神经元和LMCI的因素富集了，在进行小规模筛选后，一组表现出预期表达模式的因素被隔离，证实了这项研究开发的方法是普遍有效的。