放線菌におけるグルコースによる形態分化抑制機構の解明

阐明葡萄糖抑制放线菌形态分化的机制

• 批准号: 02F00215
• 负责人: 堀之内 末治
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00215/
• 关键词: 放線菌; グルコース制御; 形態分化; 二次代謝; 分泌酵素

放線菌の二大特徴である形態分化と二次代謝は、グルコースによるカタボライト抑制を受け、この機構の解明は放線菌の基礎的・応用的理解に極めて重要である。1.生化学的手法を用いたGlkA結合蛋白の探索グルコースによるカタボライト抑制にはグルコースキナーゼGlkAが必須であることが知られている。これに基づき、アフィニティークロマトグラフィーによってStreptomyces griseus総蛋白からGlkA結合蛋白の探索を行った。現在、結合蛋白の候補として10本のSDS-PAGEバンドが得られている。このうち1本に関してN末端アミノ酸配列解析を行い、S.coelicolorの蛋白データベースと照合したところ、これはSCD95A.14と高い相同性を持つ蛋白のバンドである可能性が示唆された。残りの9本のSDS-PAGEバンドに関しては、今後順次N末端アミノ酸配列解析を行う。2.遺伝学的手法を用いたグルコースカタボライト抑制に関わる遣伝子群の探索ショットガンクローニング法を用い、グルコースカタボライト抑制に関わる遺伝子群の探索を行った。S.griseus変異株であるVHK4株を宿主とし、S.griseus野生株の遺伝子断片ライブラリーを低コピーベクターを用いて導入した。VHK4株は、胞子形成に関してグルコースカタボライト抑制が生じない、すなわち野生株では胞子形成に至らない高濃度グルコース培地にて胞子形成に至る変異株である。高濃度グルコース含有培地にて胞子形成に至らなくなった株を選別した結果、約3,000株の遺伝子導入体から1株の目的遺伝子保持候補株が得られた。これに関して遺伝子配列を決定した結果、この配列は約1.0kbであり、1つの完全orf及びC末端、N末端にそれぞれ部分orfを持つ部分に該当することが判明した。今後、この蛋白に関する表現型の観察を行う。さらに、S.griseus野生株を宿主とし、S.griseus野生株自身の遺伝子断片ライブラリーを高コピーベクターを用いて導入した。高濃度グルコース含有培地にて胞子形成に至るようになった株を選別した結果、約6,000株の遺伝子導入体から2株の目的遺伝子保持候補株が得られた。今後、これらの配列に関して、真にグルコースカタボライト抑制に関わる遺伝子の同定を行い、その機能を解析する。

The second generation of the two special strains of bacteria, the second generation of bacteria, the inhibition of bacteria, and the understanding of the use of bacteria are very important. 1. Biochemical techniques are used to explore the combination of GlkA and protein in order to detect the inhibition of GlkA. To explore the binding protein of Streptomyces griseus, we need to explore the binding protein of GlkA. At present, the combination of protein waiting list 10 of this SDS-PAGE has been successfully tested. This book is based on the analysis of the N-terminal acid column, S.coelicolor protein, protein, This is the last 9 books of SDS-PAGE, and the next N-terminal acid column will be analyzed. two。 The method of learning is to explore the subgroup of the child by using the method of inhibiting the subgroup of the child. S.griseus strain, VHK4 strain, host strain, wild strain, S.griseus strain, wild strain and wild strain. VHK4 plant, cell formation, cell formation and cell formation. The high degree of agaricum contains the results from the cell formation to the selection of the plant, and about 3000 plants are introduced into the target plant to keep the candidate strain successful. The sub-configuration determines the results, the configuration is about 1.0kb, the full orf is 1, and the C-terminal, N-terminal, partial orf holds the result. In the future, the protein will be tested in the form of a table. The wild strain of S.griseus, the host of the wild strain of S.griseus, and the fragment of the wild strain of S.griseus were used to enter the plant. The high degree of agaricum contains the results from the formation of spores to the selection of different strains, and the introduction of about 6000 strains into two target strains to keep the candidate strains successful. In the future, the system will be assigned to the system, and the real information will be used to restrain the operation of the system.

项目成果

Y.Ohnishi: "Deprogrammed sporulation in Streptomyces"FEMS Microbiol. Lett.. 216. 1-7 (2002)

Y.Ohnishi：“链霉菌中的去编程孢子形成”FEMS Microbiol。