トランスジェニックマウスを用いた体細胞突然変異誘導に関与する要素及び要因の解明

使用转基因小鼠阐明参与体细胞突变诱导的元件和因素

• 批准号: 02J02130
• 负责人: 寺内 亜希子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J02130/
• 关键词: 体細胞突然変異; トランスジェニックマウス; IgH鎖; 抗体タンパク質発現; B細胞分化; 抗体タンパク発現

体細胞突然変異は抗体の多様性獲得機構のひとつである。しかしこの分子機構、特にIgH鎖遺伝子の3'エンハンサー(3'E)の体細胞突然変異発現における役割は明らかではない。我々は、体細胞突然変異の高頻度な発現に寄与するシス領域をトランスジェニックマウスを用いて解析した。用いた3種類のIgH鎖導入遺伝子はプロモーター、VDJ遺伝子、イントロンエンハンサー、C遺伝子を共通にもち、3'Eの構造は1)3'Eのないもの、2)3'EのHS1とHS2のみのもの、3)3'Eを総て(HS1,HS2,HS3b,HS4)もつものである。これら導入遺伝子はC領域としてヒトCμ遺伝子を、またB細胞分化を考慮し膜貫通領域はない。その結果HS3bもしくはHS4が体細胞突然変異を誘導するシス領域であった。次にこのトランスジェニックマウスを用いて分泌型IgH鎖が及ぼすB細胞分化と抗体遺伝子発現への影響を検討した。その結果IgH鎖導入遺伝子由来のm-RNAは確認できたが、そのタンパク発現はpre-B細胞段階から抑制されていた。このB細胞分化は、サロゲートL鎖欠損マウスのそれと類似していることから、分化のスタート時点で分泌型IgH鎖を持つB細胞は、おそらくサロゲートL鎖と複合体を作り、pre-B細胞段階でのBCR発現を阻害しているものと推測できる。またこのトランスジェニックマウスにNP-CGGを頻回免疫して得られた脾臓B細胞のハイブリドーマにおける、在来もしくは導入遺伝子由来のIgH鎖タンパク及びm-RNAの産生能の解析によると、在来遺伝子由来のm-RNA及びタンパクの産生がみられたが、導入遺伝子由来のm-RNAは産生されているにもかかわらず抗体タンパク発現はほとんど抑制されていた。このことから骨髄分化段階での厳しい選択から逃れたB細胞が、抗体産生段階でのB細胞クローン集団を形成していると思われる。

Somatic cell sudden variation ひと antibody <s:1> polymorphism acquisition mechanism ひと ひと である である. し か し こ の molecular machinery, special に IgH lock heritage 伝 の 3 'son エ ン ハ ン サ ー (3' E) の somatic - different 発 now suddenly に お け る service cut は Ming ら か で は な い. I 々 は, somatic suddenly - different の high frequency な 発 に send and す る シ ス field を ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を with い て parsing し た. With い た 3 kinds の IgH lock import legacy 伝 son は プ ロ モ ー タ ー, VDJ heritage 伝, イ ン ト ロ ン エ ン ハ ン サ ー, C but 伝 を common に も ち, 3 'E は の structure 1) 3 E の な い も の, 2) the 3' E の HS1 と HS2 の み の も の, 3) 3 'E を 総 て (HS1, HS2, HS3b, HS4) も つ も Youdaoplaceholder0. こ れ ら import legacy 伝 son は C field と し て ヒ ト C mu heritage 伝 を, ま た B cell differentiation を consider し transmembrane domain は な い. Youdaoplaceholder0 results: HS3b く く く HS4が somatic cell sudden mutation を induces するシス domain であった. Time に こ の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を with い て secretion IgH が lock and ぼ す B cell differentiation と antibodies have son but 伝 発 へ の influence を beg し 検 た. そ の results IgH lock import legacy 伝 son origin の m - RNA は confirm で き た が, そ の タ ン パ ク 発 now は pre - B cells Duan Jie か ら inhibit さ れ て い た. は こ の B cell differentiation, サ ロ ゲ ー ト L owe lock loss マ ウ ス の そ れ と similar し て い る こ と か ら, differentiation の ス タ ー ト point で secretion IgH を lock hold つ B cell は, お そ ら く サ ロ ゲ ー ト L lock と complex を り, pre - B cells Duan Jie で の BCR 発 now を resistance against し て い る も の と speculation で き る. ま た こ の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス に NP - CGG を frequency back to immune し て have ら れ た splenic B cells の ハ イ ブ リ ド ー マ に お け る, in to も し く は import legacy 伝 son origin の IgH lock タ ン パ ク and び の m - RNA can produce の parsing に よ る と, in to have 伝 origin の m - RNA and び タ ン パ ク の produce が み ら れ た が, import but 伝 origin の m - RNA は produce さ れ て い る に も か か わ ら ず antibody タ ン パ ク 発 now は ほ と ん ど inhibit さ れ て い た. こ の こ と か ら bone marrow differentiation Duan Jie で の 厳 し い sentaku か ら fled れ た が B cells and antibodies Duan Jie で の B cells ク ロ ー ン set 団 を form し て い る と think わ れ る.

项目成果

寺内亜希子, 東隆親: "体細胞突然変異における3'エンハンサーの寄与"臨床免疫. 33(5). 573-580 (2000)

Akiko Terauchi、Takachika Higashi：“3 增强子在体细胞突变中的贡献”临床免疫学 33(5) (2000)。

東隆親, 寺内亜希子: "Ig遺伝子の転写活性と体細胞突然変異"Annual Review 免疫 1998. 79-85 (1997)

Takachika Higashi、Akiko Terauchi：“Ig 基因转录活性和体细胞突变”免疫学年度评论 1998. 79-85 (1997)

Akiko Terauchi: "A Pivotal Role for DNase I-Sensitive Regions 3band/or 4 in the Induction of Somatic Hypermutation of IgH Genes"The Journal of Immunology. 167. 811-820 (2001)

Akiko Terauchi：“DNase I 敏感区 3 带/或 4 在 IgH 基因体细胞超突变诱导中的关键作用”免疫学杂志。

東隆親, 寺内亜希子: "IgH遺伝子の転写活性と体細胞突然変異"Annual Revieew免疫1998. 79-85 (1997)

Takachika Higashi、Akiko Terauchi：“IgH 基因转录活性和体细胞突变”免疫学年度评论 1998. 79-85 (1997)

AKIKO TERAUCHI: "A Pivotal Role for DNase I-Sensitive Regions 3b and/or 4 in the Induction of Somatic Hypermutation of IgH Genes"The Journal of Immunology. 167. 811-820 (2001)

AKIKO TERAUCHI：“DNase I 敏感区 3b 和/或 4 在 IgH 基因体细胞超突变诱导中的关键作用”免疫学杂志。