初代培養細胞に発現しているトランスフォーメーション抑制遺伝子の包括的単離機能解析

申請者は、cDNAサブトラクション法により初代培養細胞に発現しているトランスフォーメーション抑制遺伝子の候補遺伝子(TRIFと命名)を71種類単離した。単離してきた遺伝子のうち、TRIF52/periostin,新規低分子量Gタンパク質TRIF97の機能解析を行った。更に、cDNAサブトラクション法でとれてきた71種類の遺伝子群を全体像としてとらえたとき、アミノ酸トランスポーターやチトクロームCなど細胞内代謝に関係している遺伝子が多数存在したことから、細胞内代謝と細胞がん化についても解析を行った。1)Periostinの発現と癌の発生機構の関係について、前立腺癌をモデルに解析を行った。前立腺癌では、periostinの発現が抑制されていた。また、Periostinの発現が認められない前立腺癌細胞にperiostinを導入すると、マトリゲルでの転移能が抑制され、その抑制にはperiostinのC末端が必要十分であることがわかった。次に、Periostinの発現をヒト正常細胞を段階的に悪性化した細胞系列(RB細胞系列)で調べてみたところ、正常から不死化や造腫瘍性の段階でPeriostinの発現が消失していた。以上のことから、periostinの発現消失は、がん細胞の転移能や造腫瘍性関連している。2)新規低分子量Gタンパク質TRIF97の機能解析を行ったところ、GTP結合活性は認められたものの、GTP分解能は、現在のところ確認できなかった。今後、細胞抽出液などを用いてGTP分解能について検討する。3)細胞内代謝と細胞がん化について検討するため、細胞周期と細胞内代謝産物(ROS)との関連について調べたところ、G0期からG1後期にかけてROSレベルが上昇し、ROSのスカベンジャーを処理すると細胞周期の進行がG1後期で抑制された。また、ROS産生経路の1つと考えられるアミノ酸代謝モデルにおいても、生理的条件下でのアミノ酸枯渇は細胞周期をG1後期に停止することが分かった。これらの細胞周期制御機構は新しいチェックポイント機構と考えられ、今後、これらのチェックポイント機構の解析と細胞がん化との関係について研究する。

申請者は、cDNAサブトラクション法により初代培養細胞に発現しているトランスフォーメーション抑制遺伝子の候補遺伝子(TRIFと命名)を71種類単離した。単離してきた遺伝子のうち、TRIF52/periostin,新規低分子量Gタンパク質TRIF97の機能解析を行った。更に、cDNAサブトラクション法でとれてきた71種類の遺伝子群を全体像としてとらえたとき、アミノ酸トランスポーターやチトクロームCなど細胞内代謝に関係している遺伝子が多数存在したことから、細胞内代謝と細胞がん化についても解析を行った。1)Periostinの発現と癌の発生機構の関係について、前立腺癌をモデルに解析を行った。前立腺癌では、periostinの発現が抑制されていた。また、Periostinの発現が認められない前立腺癌細胞にperiostinを導入すると、マトリゲルでの転移能が抑制され、その抑制にはperiostinのC末端が必要十分であることがわかった。次に、Periostinの発現をヒト正常細胞を段階的に悪性化した細胞系列(RB細胞系列)で調べてみたところ、正常から不死化や造腫瘍性の段階でPeriostinの発現が消失していた。以上のことから、periostinの発現消失は、がん細胞の転移能や造腫瘍性関連している。2)新規低分子量Gタンパク質TRIF97の機能解析を行ったところ、GTP結合活性は認められたものの、GTP分解能は、現在のところ確認できなかった。今後、細胞抽出液などを用いてGTP分解能について検討する。3)細胞内代謝と細胞がん化について検討するため、細胞周期と細胞内代謝産物(ROS)との関連について調べたところ、G0期からG1後期にかけてROSレベルが上昇し、ROSのスカベンジャーを処理すると細胞周期の進行がG1後期で抑制された。また、ROS産生経路の1つと考えられるアミノ酸代謝モデルにおいても、生理的条件下でのアミノ酸枯渇は細胞周期をG1後期に停止することが分かった。これらの細胞周期制御機構は新しいチェックポイント機構と考えられ、今後、これらのチェックポイント機構の解析と細胞がん化との関係について研究する。