CENP-Bboxに依存した新規セントロメア構造形成における分子機構の解析

依赖CENP-Bbox形成新着丝粒结构的分子机制分析

基本信息

  • 批准号:
    02J05297
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.22万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

セントロメアは、高等真核生物がもつ遺伝情報(染色体)の分配、維持に必須な機能構造である。このセントロメアの形成に必須であるCENP-A蛋白質が、ヒトセントロメアDNA上に新規集合するためには、CENP-B蛋白質が結合するDNA配列、CENP-B box配列が重要である。しかし、CENP-B、CENP-Aの両蛋白質間には、直接の相互作用は見いだされていない。そこで昨年度は、CENP-B蛋白質と直接相互作用する因子の探索を行い、新規の遺伝子(CENP-B Associated Protein 1;CBAP1)を獲得、このCBAP1蛋白質の一部をマウスに免疫した。今年度はまず、昨年度に得られたマウス個体、および新規に免疫を行った数匹の個体から、抗CBAP1抗体のみを産生する細胞株を、約数十株単離した。さらに、これらの株のうちでも、より抗体価の高い抗体を産生するものを選び、この抗体を用いて免疫沈降法を行ったところ、細胞抽出液中に含まれるCBAP1蛋白質のほぼ95%を、特異的に回収することができた。そこで現在、CBAP1複合体の回収、精製方法について、この抗体を用いて具体的な条件検討を行っている。一方、複合体の精製とは別の視点からも、CBAP1とCENP-A蛋白質との関連について検討を行っている。具体的には、RNS干渉と呼ばれる手法を用いて、細胞内のCBAP1蛋白質の発現量を本来の約15%まで低下させた。その結果、CBAP1蛋白質量の低下に伴って、本来共局在するはずの、CENP-A蛋白質とCENP-B蛋白質が、共局在を示さなくなることを発見した。この結果は、CBAP1とCENP-A,CENP-B蛋白質の集合の間に直接、もしくは間接的なつながりが存在するという、当初の作業仮説を支持する、予備的ではあるが有力な根拠となるものであった。
The distribution and maintenance of genetic information (chromosomes) in advanced eukaryotes and advanced eukaryotes requires the ability of computers to generate genes. It is necessary to check the CENP-A protein profile, the new rule collection on the DNA, the combination of the CENP-B protein with the DNA configuration, and the CENP-B box configuration on the DNA configuration. Nucleic acid, CENP-B and CENP-A proteins were isolated from each other and directly interacted with each other. Last year, CENP-B protein, direct interaction, factor exploration, new rules and regulations (CENP-B Associated Protein 1

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Jun-ichirou Ohzeki: "CENP-B box is required for denovo centromere chromatin assembly on human alphoid DNA"The Journal of Cell Biology. 159. 765-775 (2002)
Jun-ichirou Ohzeki:“CENP-B 盒是人类类 DNA 上着丝粒染色质从头组装所必需的”《细胞生物学杂志》。
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