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遺伝子発現制御における転写因子GATA1ネットワークの解明

阐明转录因子 GATA1 网络在基因表达调控中的作用

基本信息

批准号：
02J06260
负责人：
西川恵三
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J06260/
关键词：
ゼブラフィッシュ GATA1 二量体 pbr 造血 Nrf2 p300 GATA配列 Self-association アセチル化トランスジェック GFP 変異体

项目摘要

本年度の研究によって、以下の諸点を明らかにした。1.ノックダウン法を用いたpbrの機能解析:ゼブラフィッシュ初期胚へアンチセンスモルフォリノオリゴを注入し、pbrのノックダウン胚(pbrモルファント)の表現型を解析した結果、低色素性の血球産生による貧血が観察された。pbrモルファントにおいて、ヘモグロビン合成に関わる遺伝子群b-globin、alas-e、aladの発現をin situ hybridization法を用いて解析した結果、野生型との間に有意な差は観察されなかった。2.GATA1の新規標的遺伝子pbrの発現部位の同定:ゼブラフィッシュのgata1変異胚と野生胚を用いたサブトラクション法によりGATA1の標的遺伝子を探索した結果、pbrを単離した。同定されたGATA1の新規標的遺伝子pbrの発現をin situ hybridization法を用いて解析した。盤割期、胞胚期では、細胞全体に発現していた。原腸胚期、尾芽期では低下し、体節期では造血部位および前腎管で発現が観察された。この造血部位での発現は、gata1変異胚で大きく低下したが、前腎管での発現に変化は見られないことが明らかとなった。3.GATA1と相互作用する因子の単離:GATA1と協調的に機能する転写因子を明らかにするために、生化学的手法を用いた相互作用因子の精製・同定を行った。予備的実験として、転写因子Nrf2にFLAG及びHis標識を行った組み換えタンパクを作製し、HeLa細胞の核抽出液を用いて、Nrf2の相互作用因子の精製を行った。その結果、約80kDa及び400kDaの相互作用因子の精製・同定に成功した。

This year's research is focused on the following points: 1. Function analysis of pbr in the application of the "pbr" method: phenotypic analysis of pbr in the initial stage of embryo development, anemia detection in the production of hypopigmented blood cells. The results of analysis using site hybridization method and wild-type analysis were compared. 2. The identification of pbr expression sites of GATA1 new target gene: GATA1 heteroembryos and wild embryos were explored by using the GATA1 target gene detection method. The new GATA1 standard gene pbr is found in situ hybridization. The whole cell appears at the stage of discoid and embryo. At gastrula stage, tail bud stage, hematopoietic site and pronephridial duct stage, it was observed that the blood flow rate decreased. The development of the hematopoietic part of the body is different from that of the gata1. The development of the renal duct is different from that of the gata1. The development of the renal duct is different from that of the gata 1. 3. Separation of GATA1 and interaction factors: The function of GATA1 and coordination is clearly defined, and biochemical methods are used to refine and determine interaction factors. The preparation of Nrf2, FLAG and His tags, the preparation of HeLa cell nuclear extracts, and the purification of Nrf2 interacting factors The results showed that the purification and determination of interaction factors of about 80kDa and> 400kDa were successful.