植物培養細胞におけるAl障害メカニズムおよびアポトーシスの解析

Al损伤机制及培养植物细胞凋亡分析

基本信息

  • 批准号:
    02J07354
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.3万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2004
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

タバコ培養細胞(BY-2)を用いて細胞レベルでのAl障害機構を解析するために、様々な条件下でAl処理を行いAl処理細胞をサンプリングし、1.特異的Al吸着の認められた粒子(plastid)の解析2.アポトーシス誘導条件の解析を行った。また、Alと同様に土壌有害重金属であるCdにも着目し、3.Cd障害応答とAl障害応答との差異から新たなAl障害メカニズムの解析を試みた。1.ポリリジンを塗布したスライドガラス上での細胞培養系が確立したことにより、一つの細胞を顕微鏡下で観察しつつ、様々な処理を行うことが可能となった。細胞内粒子(plastid)へのAl吸着は100μM Al処理区では、約2〜4時間処理後にのみ認められた。その後、Alの脱着が生じるわけではなく粒子自体が消失していくことが、同一細胞の経時的観察により確認された。2.動物細胞では報告のあったアポトーシスで代表される細胞膜のフリップフロップ現象がアネキシンVを用いた蛍光染色法によりタバコ培養細胞においても確認された。ただし、顕著な応答が確認されたのはプロトプラスト化した細胞だけで、通常の細胞壁が存在する細胞では応答に再現性がとれず、さらなる実験系の工夫が必要である。3.CdもAlと同様に植物細胞において酸化ストレスが誘導された。顕著な事象としては葉脈における赤色物質の沈着であり、おそらく抗酸化物質であるポリフェノール類の合成量が増加したと考えられた。この赤色部位と量はCd局在性と非常に高い相関性を示すことがトレーサーCd-109を用いたラジオグラフィにより明らかとなった。同様にAl局在性と酸化ストレスについて考察するためにAlトレーサーを用いたラジオグラフィを行っている。
タ バ コ cultured cells (BY - 2) を い て cells レ ベ ル で の Al handicap of institutions を parsing す る た め に, others 々 な under the condition of the で Al 処 を line い Al 処 Richard cells を サ ン プ リ ン グ し, 1. Specific Al adsorbs <s:1> recognizing められた particles (plastid) <s:1> analysis 2. Youdaoplaceholder1 シス シス induction conditions <e:1> analysis を rows った. ま た, Al と with others に harmful heavy metal soil 壌 で あ る Cd に も mesh し, 3. The Cd handicap of 応 answer と Al handicap of 応 answer と の differences か ら new た な Al handicap of メ カ ニ ズ ム の parsing を try み た. 1. ポ リ リ ジ ン を coated し た ス ラ イ ド ガ ラ ス on で の cell culture system が establish し た こ と に よ り, a つ の cells を 顕 micro microscopically で 観 examine し つ つ, others 々 な 処 Richard を line う こ と が may と な っ た. Intracellular particles (plastid)へ へ Al adsorb the <s:1> 100μM Al treatment area で, and after about 2 to 4 hours of treatment, に み み recognize められた. そ の after born, Al の the が じ る わ け で は な く particles of autologous が disappear し て い く こ と が, the same cells の 経 観 when examine に よ り confirm さ れ た. 2. Animal cells で は report の あ っ た ア ポ ト ー シ ス で representative さ れ る membrane の フ リ ッ プ フ ロ ッ プ phenomenon が ア ネ キ シ ン V を with い た 蛍 light staining に よ り タ バ コ culture cell に お い て も confirm さ れ た. た だ し, 顕 な 応 answer が confirm さ れ た の は プ ロ ト プ ラ ス ト change し cells た だ け で exist, the cell walls of usually の が す る cells で は 応 answer に reproducibility が と れ ず, さ ら な る be 験 is の time が necessary で あ る. 3.Cd と Alと is similar to に plant cells にお て て acidification ストレスが induction された. 顕 the な things like と し て は veins に お け る red material の shen the で あ り, お そ ら く acidification substance で あ る ポ リ フ ェ ノ ー ル class の synthesis in が raised add し た と exam え ら れ た. こ の と red parts quantity は Cd bureau in sexual と very high に い phase masato を shown す こ と が ト レ ー サ ー を Cd - 109 with い た ラ ジ オ グ ラ フ ィ に よ り Ming ら か と な っ た. With others in に Al bureau in the sexual と acidification ス ト レ ス に つ い て investigation す る た め に Al ト レ ー サ ー を with い た ラ ジ オ グ ラ フ ィ を line っ て い る.

项目成果

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