レプトマイシンBを用いた核外移行蛋白質の同定とその機能に関する研究

细霉素B的核输出蛋白鉴定及其功能研究

• 批准号: 02J08543
• 负责人: 鎌田 綾子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J08543/
• 关键词: レプトマイシンB; 核外移行; Crm1

レプトマイシンB(LMB)は、核外移行シグナルの受容体Crm1に特異的に共有結合し、蛋白質核外移行を阻害する。最終年度である今年度は、以前のスクリーニングにより見いだしたLMB添加による微小管構造の変化に関する解析を引き続き行った。これまでの解析の結果から、LMB添加後にM期の紡錘体微小管様構造体が核内に生じること、この構造体が様々な面でM期の紡錘体微小管とは異なることが明らかになっていた。これらのことから、以下の3つの仮説をたてた。(1)LMB添加によりpremature mitosisが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じた。(2)LMB添加により核内のtubulin濃度が上昇し、核内微小管の重合が起きた。(3)LMB添加により、核内に微小管重合を引き起こす因子Xが蓄積し、その結果核内で微小管重合が起きた。これらの仮説を元に実験を行った。まず(1)の仮説を検討するために、前年度行った実験の確認も含めて。Spindle pole body(SPB)、微小管、キネトコア、核膜などの蛍光マーカー蛋白質を発現する株を構築し、単染色、二重染色、三重染色して、LMB添加後の紡錘体微小管様構造体の性質を調べた。その結果SPB、キネトコアともに、微小管上には存在せず、微小管上以外の核膜に留まっていることが明らかになった。このことは前年度の実験と同様M期の紡錘体微小管とは異なることを示唆する。またM期特異的なリン酸化残基を認識する抗体MPM-2を用いた実験でも、LMB添加後に特にMPM-2認識蛋白質が増えることもなく、さらに窒素飢餓で細胞周期をG1期に止めた状態でLMBを添加しても紡錘体微小管様構造が生じたことからも、LMB添加による微小管構造の変化は細胞周期には非依存的、すなわち(1)premature mitosisiが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じている、という仮説が否定できることが示された。現在、(2)、(3)の仮説について検討するため、実験を行っているところであります。

LMB is a receptor specific to Crm1 that binds to and blocks protein extranuclear migration. Last year, this year, the previous year, the previous year, After LMB addition, M phase spindle microtubule structure was generated in nucleus, and M phase spindle microtubule structure was generated in nucleus. The following is a list of three categories: (1)LMB is added to premature mitosis and similar spindle microtubule is produced. (2) The tubulin concentration in the nucleus increased due to the addition of LMB, and the microtubule overlap in the nucleus began. (3)LMB addition, nuclear microtubule overlap initiation factor X accumulation, results in nuclear microtubule overlap initiation. This is the first time I've ever been to a hotel. (1) Review and confirmation of previous year's performance Spindle pole body(SPB), microtubule, microtubule, nuclear membrane, fluorescence, protein development, plant construction, single staining, double staining, triple staining, LMB addition, spindle microtubule structure properties were modulated. The result is SPB, microtube, microtube and nuclear membrane. This is the same as the previous year's results, but the spindle microtubules are different. MPM-2 recognizes protein in the presence of LMB, and MPM-2 recognizes protein in the presence of LMB (1)Premature mitosis-like spindle microtubule formation, negation, indication Now,(2),(3), and so on.