ANALYSIS OF NGF SIGNAL IN NEUROBLASTOMA AND ITS CLINICAL APPLICATION

神经母细胞瘤NGF信号分析及其临床应用

• 批准号: 13671865
• 负责人: MATSUNAGA Tadashi
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13671865/
• 关键词: NEUROBLASTOMA; NGF; TRK A; ADENOVIRUS; アデノウイルス; trkA

神経芽腫の生物学的特性を決定付ける様々なgenetic eventと神経分化に関与するプロト癌遺伝子の発現のうち、腫瘍細胞におけるNGF (Nerve Growth Factor)のシグナル(trk A,神経特異的src)の発現の有無は、患児の予後に密接に関連する。本研究ではtrk A全長cDNAを用いtrk A発現アデノウイルスを作成し、これを神経芽腫培養細胞に感染させ、NGF処理により神経分化誘導のモデルを確立する。昨年度、作成したtrk A発現アデノウイルスをN-myc遺伝子の増幅した神経芽腫培養細胞NB-1に感染させ、Mutiplicity of Infection(=moi,プラーク形成単位/細胞)とNGF濃度を段階的に調節し、ウイルスの毒性と蛋白発現量、形態的な分化誘導の変化を検討した。その結果、moi=20以上,NGF=50ng/ml以上で、感染後2週間でganglion-like clusterの形成と太く長い神経突起の伸張といった形態的な神経分化が誘導された。形態的分化の他に、N-myc mRNAのdown regulation、Neurofilament mRNAのup regulationを定量的RNA-PCRでチェックしたところ、形態的な変化に一致してこれらの遺伝子発現の変化が確認された。また、分化誘導に伴うimmediately early geneのc-fos mRNAの一過性の発現も定量的RNA-PCRで確認することができた。Src遺伝子の調節領域をアンチセンス方向にアデノウイルスに組み込み、アンチセンスsrc発現アデノウイルスを構築し、神経芽腫細胞株に感染させたところsrc蛋白の発現減少が認められた。神経芽腫NB-1に、trk A発現アデノウイルスとアンチセンスsrc発現アデノウイルスを二種感染させてNGFを投与したところ、神経突起の誘導はやや抑制された。神経芽腫におけるNGFシグナルの神経分化誘導にはsrc蛋白が重要な役割を果たしている可能性が示唆された。

The biological characteristics of neuroblastoma determine the relationship between genetic events and neurodifferentiation, the development of tumor oncogenes, the presence or absence of NGF (Nerve Growth Factor) in tumor cells, and the close connection between neuroblastoma and postnatal development. In this study, trk A full-length cDNA was used to construct the gene expression vector, and to establish the gene expression vector for infection of cultured cells and induction of neural differentiation by NGF treatment. In the past year, the expression of N-myc protein increased in vitro, and the infection, mutility of Infection(=moi, formation unit/cell), NGF concentration and level regulation, toxic protein expression and morphological differentiation induction of NB-1 cells were discussed. The results showed that moi=20 or more,NGF=50ng/ml or more, ganglion-like cluster formation, long neurite elongation and neurite differentiation were induced within 2 weeks after infection. Morphological differentiation and other factors, N-myc mRNA down regulation, Neurofilament mRNA up regulation, quantitative RNA-PCR, morphological differentiation and consistent transformation of these factors were identified. Induction of differentiation was accompanied by transient expression of c-fos mRNA immediately early gene and quantitative RNA-PCR confirmation. Src gene regulatory domain is lost in the direction of gene expression, src gene expression is lost in the construction of gene expression, and the expression of src protein is reduced in the infection of neuroblastoma cell lines. Neuroblast NB-1, Trk A, Trk A, Trk A, The possibility that NGF may be involved in the induction of neuronal differentiation and that src protein may play an important role in the induction of neuronal differentiation is also discussed.