RNA性転移因子(レトロポゾン)の組換え動物体内での動態可視化

重组动物中 RNA 转座元件（反座子）动态的可视化

• 批准号: 13740425
• 负责人: 大島 一彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13740425/
• 关键词: LINE; EGFP; SW1; レトロポジション; メダカ

LINEの生体内でのリアルタイムの動態を可視化するために、メダカSW1にEGFPカセットを導入する。EGFPはGFP(緑色蛍光タンパク質)が改良されたもので、カセット自体の内部にはイントロンが逆向き(アンチセンスな向き)に挿入されている。すなわち、3'UTRにEGFPカセットを挿入されたSW1は、I)転写後にEGFPカセット内のイントロンがスプライシングを受け、II)翻訳を受けて自身のエンドヌクレアーゼおよび逆転写酵素ドメインによってゲノムの新たな部位に挿入およびcDNA合成をする。すると、III)転移したSW1に由来するEGFPが翻訳を受けるとGFPを検出することができる。先年度、EGFPカセットを持つコンセンサスなSW1をメダカβアクチンンのプロモーターの下流に挿入したプラスミド(pOBA-SW1-EGFP)を構築した。pOBA-SW1-EGFPをメダカ培養細胞にトランスフェクションしたところ、GFPの発現は観察されなかった。今年度は、pOBA-SW1-EGFPのメダカ培養細胞における不活性が、いかなる転移段階(転写、翻訳、転移)が律速となった結果であるのかを検討した結果、翻訳過程以降が律速となっている可能性が強く示唆された。この結果に基づき、その改善を試み、さらにこの構築物をメダカ1細胞期胚に導入し、SW1の発生過程における転移を検出することを目標としたが、転移の検出には至らなかった。

The dynamic state of the LINE is visualized in the body. EGFP (green light) is modified to include the following elements: The EGFP gene is inserted into the 3'UTR and the EGFP gene is inserted into the EGFP gene. The EGFP gene is inserted into the EGFP gene after the EGFP gene is inserted into the EGFP gene. The EGFP gene is inserted into the EGFP gene after the EGFP gene is inserted into the EGFP gene. The EGFP gene is inserted into the EGFP gene after the EGFP gene is inserted into the EGFP gene. The EGFP gene is inserted into the EGFP gene after the EGFP gene is inserted into the EGFP gene. 3) The number of copies of the original copy. In previous years, EGFP was established as a downstream-to-downstream-to-downstream-to- pOBA-SW1-EGFP is a new type of cell culture. In this year, pOBA-SW1-EGFP cells were cultured at different rates, and the results showed that there was a strong possibility of decreasing the rate of inactivation. The results of this study are as follows: (1) The structure of the plant was introduced into the plant during the development of the plant, and (2) The structure of the plant was introduced into the plant during the development process.

项目成果

Ikuo Ogiwara, Masaki Miya, Kazuhiko Ohshima, Norihiro Okada: "V-SINEs : A New Superfamily of Vertebrate SINEs That Are Widespread in Vertebrate Genomes and Retain a Strongly Conserved Segment within Each Repetitive Unit"Genome Research. 12. 316-324 (2001)

Ikuo Ogiwara、Masaki Miya、Kazuhiko Ohshima、Norihiro Okada：“V-SINE：一种新的脊椎动物 SINE 超家族，广泛分布于脊椎动物基因组中，并在每个重复单元内保留高度保守的片段”基因组研究。