ラビリンチュラ類微生物における新規DHA生合成機構の解明

阐明迷宫微生物中新的 DHA 生物合成机制

• 批准号: 13760072
• 负责人: 秋 庸裕
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760072/
• 关键词: ドコサヘキサエン酸; 不飽和化酵素; ラビリンチュラ; ポリケチド; 脂肪酸合成酵素; 高度不飽和脂肪酸

DHA生産性海洋微生物ラビリンチュラ類の新規単離株を材料として,DHA生合成に関わる酵素群の遺伝子を探索した。真核生物に共通するDHAなど高度不飽和脂肪酸の生合成においては,脂肪酸不飽和化酵素が重要である。その特徴的な構造として3つのヒスチジンクラスターが存在するので,その配列をもとにしてオリゴプラィマーを設計して単離株cDNAライブラリーを鋳型としたPCRを行ったところ,オレイン酸をリノール酸に変換するΔ12不飽和化酵素及びリノール酸をγ-リノレン酸に変換するΔ6不飽和化酵素にそれぞれ対応すると思われる遺伝子断片が得られた。さらにドコサペンタエン酸をDHAに変換するΔ4不飽和化酵素をコードすると考えられる遺伝子断片も得られており,5'-RACE法などによって全長遺伝子を取得しているところである。一方,ラビリンチュラにおいて遺伝子導入や機能解析を行っていく上で,形質転換系の開発が不可欠である。そこで,相同組換え的に遺伝子を導入するための多コピー遺伝子として18S rRNA遺伝子を単離し,塩基配列を決定した。また,外来遺伝子発現用のプロモーター・ターミネーターを同遺伝子から取得するために,inverse PCRによる単離を試みているところである。

New regulations for DHA production in marine microorganisms, plant materials and enzyme groups involved in DHA production Fatty acid unsaturating enzymes are important in the synthesis of highly unsaturated fatty acids common to eukaryotic organisms. The structure of all the characteristics of the plant is designed to be different from that of the sequence. The DNA sequence of the isolated plant is different from that of the sequence of the isolated plant. The PCR is carried out in different ways. The 5 '-RACE method is used to obtain the full length DNA fragment of the enzyme. On the one hand, the development of the qualitative transformation system cannot be missed. In addition, the same group of genes is introduced into the genome, and the 18S rRNA gene is isolated and the nucleotide sequence is determined. In addition, the gene expression of the alien gene was detected by reverse PCR and the gene expression was detected by reverse PCR.

项目成果

日本油化学会編(分担執筆): "油化学便覧"丸善. 686 (2001)

日本石油化学会编（合着）：《石油化学手册》Maruzen 686（2001）。

K.Inagaki, T.Aki, et al.: "Evidences of isozymes for Δ6 fatty acid desaturase in rat hepatocyte"Biosci. Biotech. Biochem.. (in press). (2003)

K.Inagaki、T.Aki 等人：“大鼠肝细胞中 Δ6 脂肪酸去饱和酶的同工酶”Biosci Biochem..（出版中）。

Y.Michinaka, T.Aki, et al.: "Differential response of two Δ6 fatty acid desaturases from Mucor circinelloides to low temperature"Appl. Microbiol. Biotechnol. (in press). (2003)

Y.Michinaka、T.Aki 等人：“卷枝毛霉的两种 Δ6 脂肪酸去饱和酶对低温的差异反应”，《微生物技术》（出版中）。

K.Inagaki, T.Aki, et al.: "Identification and expression of a rat fatty acid elongase involved in the biosynthesis of C18 fatty acids"Biosci. Biotech. Biochem.. 66. 613-621 (2002)

K.Inagaki、T.Aki 等：“参与 C18 脂肪酸生物合成的大鼠脂肪酸延伸酶的鉴定和表达”Biosci。

J.Huang, T.Aki, et al.: "Enzymatic preparation of glycerides rich in docosahexaenoic acid from thraustochytrid single cell oils by Candida rugosa lipase"J. Oleo Sci.. 51. 447-455 (2002)

J.Huang、T.Aki 等人：“通过念珠菌脂肪酶从破囊壶菌单细胞油中酶法制备富含二十二碳六烯酸的甘油酯”。