ビタミンD生合成調節の分子メカニズムの解明

阐明维生素D生物合成调控的分子机制

• 批准号: 13760094
• 负责人: 武山 健一
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760094/
• 关键词: ビタミンD; 1α-水酸化酵素; 副甲状腺関連ペプチド; ビタミンDレセプター; 副甲状腺ホルモン; 転写制御; レチノイドレセプター; 核内レセプター; ビタミンDレセプター(VDR); ビタミンD1α水酸化酵素; 転写抑制因子複合体; ヒストン脱アセチル化活性; VDIR; 遺伝子発現抑制

VDIRを強発現することにより、1α,25(OH)_2D_3依存的な転写抑制が顕著に認められたことから、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制においてVDRと共に必須であることを確認した。また、TSA添加により、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制が阻害されることから、HDAC2の関与の可能性が示唆された。免疫沈降の結果より、1α,25(OH)_2D_3の存在時、HDAC2およびNCoRがVDIRとVDRを含む複合体に含まれていることが明らかになった。更に、この複合体が実際に1α-nVDRE上で形成されていることをCHIP assayにて確認した。転写抑制メカニズムを解明するために行ったGST-VDIRをbaitとしたタンパク精製によりVDIRとVDRが1α,25(OH)_2D_3依存的に形成する巨大複合体を形成していることが明らかになり、更にその複合体の中にHDAC2およびNcoRが含まれていることを確認した。近年、転写抑制のメカニズムにも様々な因子が関与していることが明らかになっている。しかもそれらは結合するプロモーター配列特異的な複合体を形成していると考えられている。従って、我々が用いているビタミンD依存的に転写抑制が生じるプロモーター上にても、これまで知られていない未知の複合体が形成されている可能性が高いと考えられる。現在までの検討より、ATP依存性クロマチンリモデリング複合体がこの転写抑制に関与していることがわかっており、複数の複合体の関与も予想される。これら遺伝子の転写抑制に組織特異的な転写因子の関与が考えられるので、これら遺伝子のビタミンD依存的な発現抑制機構の組織特異性を証明するために、生化学的な手法を用いて複合体の全構成因子の同定に着手している。

VDIR is strong and strong, and 1α,25(OH)_2D_3 depends on it.とから、1α,25(OH)_2D_3による転WRITE SUPPRESSED においてVDRと公に must be confirmed by であることを.また, TSA added により, 1α,25(OH)_2D_3 による転 write suppression が されることから, HDAC2 の switch and possibility が indication された. The result of immunoprecipitation is that in the presence of 1α,25(OH)_2D_3, the HDAC2-NCoR and VDIR-VDR complexes are the same. The formation of the complex on the 1α-nVDRE was updated and the CHIP assay was confirmed.転WRITE SUPpression メカニズムを Explain するために行ったGST-VDIR をbaitとしたタンパク Refined によりVDIRとVDRが1α,25(OH)_2D_ 3 dependent に Formation す る huge complex を Formation し て い る こ と が 明 ら か に な り, に その Complex の中にHDAC2およびNcoRが contain まれていることをconfirmed した. In recent years, 転WRITING suppresses the のメカニズムにも様々な factor and していることが明らかになっている. The しかもそれらは combines with the するプロモーター to form a specific な complex を to form the していると卡えられている.従って、我々が用いているビタミンDdependence的に転WRITING Suppressionが生じるプロモーター上にても, これまでKnowledgeられていないUnknownのcomplexが FormationされているPossibilityが高いとtestえられる. Now it's time to write the ATP-dependent ATP dependency complex がこの転Inhibition and していることがわかっており, complex のSeki and もyuthink される.これら伝子の転书 inhibits にTissue-specific な転WRITING factor のrelated and が卡えられるので, これら缝子のビタミンD-dependent な発The tissue specificity of the inhibitory mechanism has been proven, and the biochemical method has been based on the identification of all the constituent factors of the complex.

项目成果

Takeyama, K., et al.: "Androgen-dependent neurodegeneration by polyglutamine-expanded human androgen receptor in drosophila"Neuron. 35. 855-864 (2002)

Takeyama, K. 等人：“果蝇中聚谷氨酰胺扩展的人类雄激素受体引起的雄激素依赖性神经变性”神经元。

Kato, S., Takeyama, K.: "Methods in Enzymology (Vol. 364)"Academic Press. (2003)

Kato, S.、Takeyama, K.：“酶学方法（第 364 卷）”学术出版社。

Kato, S., et al.: "Molecular genetics of vitamin D-dependent hereditary rickets"Hormone Research. 57. 73-78 (2002)

Kato, S. 等人：“维生素 D 依赖性遗传性佝偻病的分子遗传学”激素研究。

Watanabe M, Yanagisawa J, Takeyama K, Kato S.: "A Subfamily of RNA-binding DEAD-box proteins acts as an estrogen receptor & coactivator through the N terminal activation domain(AF-1)with an RNA coactivator, SRA."EMBOJ.. 20. 1341-1352 (2001)

Watanabe M、Yanagisawa J、Takeyama K、Kato S.：“RNA 结合 DEAD-box 蛋白的亚家族充当雌激素受体

Matsui D, Sakari M, Takeyama K, Kato S., et al.: "Transcriptional regulation of the mouse steroid 5alpha-reductase typeII gene by progesterone in brain"Nucleic Acids Res. 30. 1387-1393 (2002)

Matsui D、Sakari M、Takeyama K、Kato S. 等人：“大脑中黄体酮对小鼠类固醇 5α-还原酶 II 型基因的转录调节”核酸研究。