精神分裂病モデル動物における遺伝子発現の包活的データベース作成

创建精神分裂症模型动物基因表达综合数据库

• 批准号: 14770488
• 负责人: 窪田 恭彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770488/
• 关键词: 精神分裂病; メタンフェタミン; フェンサイクリジン; 覚醒剤; 逆耐性現象; 覚醒剤精神病; SAGE; PCP

1.メタンフェタミン投与ラットおよびフェンサイクリジン投与ラットの作成8週齢のWistar型雄性ラット(170-190g)にメタンフェタミン(4mg/kg)あるいはフェンサイクリジン(10mg/kg)を腹腔内投与し、1時間後に断頭した。断頭後、氷上にて速やかに脳を取り出し、大脳皮質を分離した。対照として、生理食塩水(1ml/kg)を腹腔内投与後、一時間後に断頭したラット大脳皮質を用いた。分離した大脳皮質は速やかにホモジネートし、AGPC変法および磁気ビーズによりmRNAを抽出した。2.SAGEライブラリーの作成・解析大脳皮質mRNAより合成した2本鎖cDNAから、種々の分子生物学的手法を用いて10塩基対の短い断片(タグ)を分離し、それらを繋げて長い分子にした後、オートシーケンサーを用いて塩基配列を決定した。この結果をSAGE専用ソフトで解析した。SAGEプロトコールにはSerial Analysis of Gene Expression Detailed Protocol version 1.0dを用い、データ解析にはSAGE analysis software 4.0.0.0を用いた。これまでのところ、メタンフェタミン(4mg/kg)、フェンサイクリジン(10mg/kg)および生理食塩水(1ml/kg)を投与し、1時間後に断頭したラット大脳皮質から作成したSAGEライブラリーから、それぞれ約40000個のtagを解析し、1万数千種類のmRNAを同定し、タグの出現頻度として遺伝子発現量を捉えることが出来た。

1. To prepare Wistar male rats (170-190g) at 8 weeks of age, the rats were injected intraperitoneally (4mg/kg) and decapitated 1 hour later. After the head is cut off, the speed is high, and the cortex is separated. After intraperitoneal injection of physiological water (1ml/kg), the head was cut off and the cortex was used. The isolated human cortex is rapidly exposed to intracellular proteins, AGPC changes, and magnetic fields to extract mRNA. 2. The molecular biology method for the production and analysis of SAGE gene fragments is to isolate and analyze the gene fragments of the large cortex by using the 10-base gene. The results of this SAGE are analyzed in detail. Serial Analysis of Gene Expression Detailed Protocol version 1.0d is available. Serial Analysis software 4.0.0.0 is available. After administration of 4mg/kg, 10mg/kg, and physiological water (1ml/kg), the SAGE was produced 1 hour later. About 40000 tags were analyzed, thousands of mRNA species were identified, and the frequency and quantity of mRNA were detected.