脂肪肝ラットにおける肝虚血再還流障害のメカニズムに関する検討と臨床応用への試み

脂肪肝大鼠肝脏缺血再灌注损伤机制研究及临床应用尝试

• 批准号: 14770638
• 负责人: 小林 聡
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770638/
• 关键词: 肝; 虚血再還流障害; apoptosis; サイトカイン; ZVAD-fmk

背景:これまでの検討で肝I/R injuryにおいてapoptosisによる肝細胞死が虚血時間の長さ、すなわち障害の強さに依存して引き起こされその後の肝障害のtriggerとなっている可能性が示唆された(Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 281:G577-585,2001)。caspase inhibitorを用いた検討では投与群においてapoptosisが抑制されその結果肝障害が軽減されることを確認した。今回ラット肝WI/R後のapoptosisによる障害機構をcaspase inhibitor(ZVAD-fmk:以下ZV)を投与し、cytokine発現という観点から検討した。方法:Wistar系雄性ラットを使用し60分の全肝I/Rを実施。A群:control群、B群:ZV投与群とし、I/R後3、6、24hに肝標本を採取。Caspase-3活性を測定。Apoptosisによる肝細胞(HC)、類洞内皮細胞(SEC)死はTUNEL法およびDNA fragmentationにより評価し、TUNEL陽性細胞数/単位細胞をapoptotic index(AI.HC,AI.SEC)とした。RT-PCR法により肝組織中のTNF-α,chemokine(MIP-1α,CINC、MIP-2)のmRNA発現を評価。結果:ZV投与により1)Caspase-3活性は抑制され、2)AI.HC、AI.SECは有意に減少。3)好中球浸潤、および肝障害は有意に軽減され、4)Cytokine.mRNAはそれぞれbaseline値まで抑制された(A群では対baseline値でTNF-α:10倍、MIP-1α:5倍、CINC:6倍、MIP-2:5倍と増強)。結論:WI/R injuryにおいてapoptosisはcytokin及びchemokineを介して好中球浸潤や肝障害を惹起している可能性が示唆された。

Background: The study of liver I/R injury in liver tissue indicates that the duration of liver cell death due to apoptosis depends on the severity of liver injury (Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 281:G577- 585, 2001). Caspase inhibitor is used in the study to determine whether apoptosis is inhibited or not. After the apoptosis, the protective mechanism of caspase inhibitor(ZVAD-fmk: ZV below) was investigated. Methods:Wistar male rats were used for 60 minutes and whole liver I/R was performed. Group A:control group, Group B:ZV group, 3h, 6h, 24h after I/R. Caspase-3 activity was measured. Liver cells (HC) and cavity-like endothelial cells (SEC) in Apoptosis were evaluated by TUNEL assay and DNA fragmentation. TUNEL positive cells/single cells were evaluated by apoptotic index(AI.HC,AI.SEC). mRNA expression of TNF-α,chemokine(MIP-1α,CINC, MIP-2) in liver tissue was evaluated by RT-PCR. Results: 1)Caspase-3 activity was inhibited; 2)AI.HC and AI.SEC were decreased intentionally. 3)4)Cytokine.mRNA was inhibited by baseline values (TNF-α:10-fold, MIP-1α:5-fold, CINC:6-fold, MIP-2:5-fold). Conclusion:WI/R injury may be caused by apoptosis mediated by cytokin and chemokine.

项目成果

Sekino Y, Kobayashi A: "Successful treatment for combined pancreato duodenal injury by a second-stage pancreaticojejunostomy following pancreatoduodenectomy"Hepatogastroenterology. (in press).

Sekino Y，Kobayashi A：“通过胰十二指肠切除术后第二阶段胰空肠吻合术成功治疗联合胰十二指肠损伤”肝胃肠病学。