産生効率が高く、物理的に安定で、生物学的半減期の短い黄体刺激ホルモン誘導体の開発

开发生产效率高、物理稳定性好、生物半衰期短的黄体生成素衍生物

• 批准号: 14770848
• 负责人: 佐藤 朝臣
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770848/
• 关键词: 黄体刺激ホルモン(LH); 遺伝子組み換え; CHO

1.LHは、生理的な排卵誘発剤であるが,広く臨床応用されているhCGと比較し,その産生効率は低く,高価であるため一般に使用される状況にない。recombinant LHの分泌効率が不良である原因として,LHβサブユニットのC末端における7個の疎水性のアミノ酸配列の存在が示唆されている。site-directed mutagenesisによりLHβ-C末端のアミノ酸残基を121から119,117,114位まて順次欠失させた変異体を作製し,CHO細胞において発現させた。各細胞を、^<35>S-システインにて標識し,免疫沈降反応にてLHβサブユニットの分泌動態を検討した。その結果,アミノ酸が2個欠失したLHβ119は,LHβと比較し,分泌効率が改善されることが示された。LHβ117,LHβ114についてもLHβと比較し,分泌効率が改善されることが示された。2.LHβと高いhomologyを有するhCGβでは,アミノ酸残基26-110間のS-S結合形成過程がタイマー形成,分泌の律速段階であることが報告されている。LHβの26,110位のシステインをsite-directed mutagenesisによりアラニンに置換し,両者間のS-S結合を欠失させ,その分泌動態に及ぼす影響について検討した。その結果,LHβ26-110はLHβと比較し,分泌半減期が短縮し,単位時間当たりの分泌量が増加することが示された。3.LHのα,β二つのサブユニットをコードする遺伝子をoverlap PCR法により結合させ,単一の遺伝子としたsingle chain LHをCHO細胞において発現させると,LHタイマーと比較しその分泌効率が向上する。LHβ26-110変異を、single chain LHにおいて導人すると,さらにsingle chain LHの分泌効率に改善することか示された。

1. LH is a physiological ovulatory inducer, and its clinical use is relatively low and high in hCG production. The reason why recombinant LH secretion rate is poor is that LHβ- site-directed mutagenesis was found in CHO cells with sequential deletion of LHβ-C-terminal amino acid residues at positions 121, 119, 117, and 114. The <35>expression of LHβ in cells was detected by immunoprecipitation assay. As a result, LHβ119 and LHβ119 were found to be deficient in two acids, respectively. LHβ117,LHβ114,LHβ 117, LHβ114, LHβ 117, LH β 117, LH β 114, LH β 117, LH β 1117, LH β 11117, LH β 1117, LH β 1 2. LH β and hCGβ are involved in the formation of S-S binding between residues 26-110, and the secretion of hCG β and hCG β is reported. LHβ 26, 110-position mutation, S-S binding, secretion dynamics, and effects of the mutation are discussed. As a result,LHβ26-110 decreased significantly compared with LHβ26-110, while LHβ 26 - 110 decreased significantly compared with LH β 26 - 110. 3. LH α,β 2-linked DNA sequence overlap PCR method, single DNA sequence overlap PCR method, LH α, β 2-linked DNA sequence overlap PCR method, LH α, β 2-linked DNA sequence overlap PCR method, LH α, β 2-linked DNA sequence overlap PCR method. LHβ26-110 variation, single chain LH secretion rate improvement