哺乳類における微量D-アミノ酸二次元一斉分析を基盤とする創薬の展開

基于哺乳动物中痕量 D-氨基酸二维同步分析的药物发现进展

基本信息

批准号：
14771265
负责人：
濱瀬健司
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771265/
关键词：
D-アミノ酸光学分割 HPLC

项目摘要

1)D-アミノ酸二次元一斉分析システムの構築本年度は平成14年度に検討した迅速光学分割と逆相ミクロカラムでのアミノ酸粗分画条件を組み合わせ、多種類のD-アミノ酸連続二次元分析を可能とするHPLCシステムを構築した。本システムはピークトラップ部に新たに開発したマルチループシステムを有しており、6本並列に組み込んだ400μLのループ切り替えにより、任意のループに目的とするアミノ酸分画を導入可能である。本システムを用いてDL-Val,-Ile,-Leu,-Phe混合標品を連続分析した結果、いずれのアミノ酸も良好な迅速光学分割が認められた。また、4種の疎水性アミノ酸全ての定量に要する分析時間は60分以内であり、迅速な二次元分析が可能であった。2)システムの評価本システムの評価を行った結果、4種の疎水性アミノ酸の検量線はいずれもD体が5-500fmol、L体が50-5000fmo1の範囲で0.999以上の良好な直線性を示した。また、4種全てのD体、L体について定量値の日内、日間変動について検討した結果、日内変動がn=5で1.5-3.0%(RSD)、日間変動が5日間で2.5-8.1%(RSD)であり、本二次元システムが良好な定量性と再現性を有することが示された。3)ラット及びマウスにおけるD-アミノ酸分析マウス大脳中の疎水性アミノ酸定量を行った結果、組織湿重量1g当たりddY/DAO+マウスでは1.23nmol、ddY/DAO-マウスでは10.85nmolのD-Leuが認められた。また、両系統とも微量のD-Val及びD-Ileが認められた。なお、マウス大脳試料における添加検量線の傾きはいずれのアミノ酸も標品について得られた傾きと良く一致しており、本システムを用いて生体試料中微量D-アミノ酸の迅速な連続二次元分析が可能であることが示された。

1）构建今年的二维D-氨基酸同时分析系统，我们已经构建了一个HPLC系统，该系统允许对各种类型的D-氨基酸进行连续分析，并将2002年研究的快速光学分辨率与在反相微柱上的粗糙氨基酸分离条件结合在一起。该系统在“峰值陷阱”部分中具有新开发的多环系统，通过将400μL的环平行掺入400μl，可以将所需的氨基酸分数引入任何环中。使用该系统分析了DL -VAL，-ile，-leu，-phe混合样品，发现所有氨基酸都具有良好的快速光学分辨率。此外，定量所有四个疏水性氨基酸所需的分析时间在60分钟内，从而可以快速进行二维分析。 2）评估该系统的结果，所有四个疏水性氨基酸校准曲线均在D形式的5-500fmol范围内，在5-500fmol的范围内，l形式为5-500fmo。此外，所有四种D和L体的定量值的每日和每日变化表明，N = 5时的每日变化为1.5-3.0％（RSD），每日变化在5天时为2.5-8.1％（RSD），表明该二维系统具有良好的定量性和重复性。 3）在小鼠脑小鼠中测定疏水性氨基酸，在DDY/DAO+小鼠中观察到1.23 nmol的D-氨基酸分析，在DDY/DAO+小鼠中观察到1.23 nmol，并且在DDY/dao-ddAy中观察到了10.85 nmol的D-Leu。此外，在这两种菌株中都观察到了痕量的D-VAL和D-EIL。小鼠大脑样品中的添加校准曲线的斜率与为所有氨基酸制备的斜率非常吻合，这表明使用该系统在生物学样品中对痕量D-氨基酸进行快速连续分析。