哺乳類における微量D-アミノ酸二次元一斉分析を基盤とする創薬の展開

基于哺乳动物中痕量 D-氨基酸二维同步分析的药物发现进展

• 批准号: 14771265
• 负责人: 濱瀬 健司
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771265/
• 关键词: D-アミノ酸; 光学分割; HPLC

1)D-アミノ酸二次元一斉分析システムの構築本年度は平成14年度に検討した迅速光学分割と逆相ミクロカラムでのアミノ酸粗分画条件を組み合わせ、多種類のD-アミノ酸連続二次元分析を可能とするHPLCシステムを構築した。本システムはピークトラップ部に新たに開発したマルチループシステムを有しており、6本並列に組み込んだ400μLのループ切り替えにより、任意のループに目的とするアミノ酸分画を導入可能である。本システムを用いてDL-Val,-Ile,-Leu,-Phe混合標品を連続分析した結果、いずれのアミノ酸も良好な迅速光学分割が認められた。また、4種の疎水性アミノ酸全ての定量に要する分析時間は60分以内であり、迅速な二次元分析が可能であった。2)システムの評価本システムの評価を行った結果、4種の疎水性アミノ酸の検量線はいずれもD体が5-500fmol、L体が50-5000fmo1の範囲で0.999以上の良好な直線性を示した。また、4種全てのD体、L体について定量値の日内、日間変動について検討した結果、日内変動がn=5で1.5-3.0%(RSD)、日間変動が5日間で2.5-8.1%(RSD)であり、本二次元システムが良好な定量性と再現性を有することが示された。3)ラット及びマウスにおけるD-アミノ酸分析マウス大脳中の疎水性アミノ酸定量を行った結果、組織湿重量1g当たりddY/DAO+マウスでは1.23nmol、ddY/DAO-マウスでは10.85nmolのD-Leuが認められた。また、両系統とも微量のD-Val及びD-Ileが認められた。なお、マウス大脳試料における添加検量線の傾きはいずれのアミノ酸も標品について得られた傾きと良く一致しており、本システムを用いて生体試料中微量D-アミノ酸の迅速な連続二次元分析が可能であることが示された。

1) Construction of D-Aspiro Acid Quadratic Analysis System This year, compared with the year 14, the rapid optical segmentation and reverse phase separation system was established by combining various D-Aspiro Acid Quadratic Analysis System. This article introduces the possibility of introducing acid into the system for the purpose of new development in the system. The results of the analysis of DL-Val,-Ile,-Leu,-Phe mixtures show that the separation of DL-Val, -Ile, -Leu,-Phe is rapid and easy. The analysis time of all four kinds of acids is less than 60 minutes, and the rapid secondary analysis is possible. 2) The results of the evaluation of the system show that the linear range of the four kinds of water soluble acids is 5-500fmol for D body and 50-5000 fmol for L body, and the linear range is above 0.999. 4 kinds of D body and L body are included in the quantitative value of intraday and daytime variation. The results of the investigation show that intraday variation n=5 1.5-3.0%(RSD), daytime variation n=5 2.5-8.1%(RSD), and this quadratic element has good quantitative value and reproducibility. 3) D-Leu acid analysis results, tissue wet weight 1g when ddY/DAO+ D-Leu acid analysis results 1.23nmol, ddY/DAO acid analysis results 10.85nmol. D-Val and D-Ile are recognized as trace amounts in the system. A rapid and continuous quadratic analysis of trace amounts of D-acid in biological samples is possible.

项目成果

A.Morikawa, K.Hamase, K.Zaitsu: "Determination of D-alanine in the rat central nervous system and periphery using column-switching high-performance liquid chromatography"Analytical Biochemistry. 312・1. 66-72 (2003)

A.Morikawa、K.Hamase、K.Zaitsu：“使用柱转换高效液相色谱法测定大鼠中枢神经系统和外周中的 D-丙氨酸”分析生物化学 312・1（2003）。