血液／尿中キラルアミノ酸の網羅的定量を基盤とする腎不全の早期低侵襲診断鑑別法開発

臨床検体において微量キラルアミノ酸の網羅的、かつ正確な定量を可能とする三次元・四次元HPLC分析を実現するため、新規マーカーとしての可能性が指摘されながら正確な定量が達成されていないトリプトファン、塩基性アミノ酸、システイン、アロイソロイシンおよびアロスレオニンの分析法を検討した。その結果、トリプトファンは光リアクターの利用に加えて移動相組成・流速を検討することで高感度蛍光分析を達成し、アロスレオニンは高分離能光学分割カラムを設計・開発することにより微量分析を達成した。また、トリプトファンは逆相、光学分割にタンデム質量分析を接続した四次元LC/LC/MS/MS装置においても高選択的微量分析を可能とした。塩基性アミノ酸およびアロイソロイシンについては三次元LC/LC/LCのカラムを検討し、塩基性アミノ酸は逆相（疎水性）、逆相（ππ相互作用）、光学分割を各次元とする装置を開発することにより選択的微量分析を実現した。アロイソロイシンは一次元目および二次元目でロイシン連鎖異性体を分離することで選択的微量分析を実現した。併せて、大阪大学医学部腎臓内科と共同で腎生検により原因疾患が判明している中軽度の腎不全患者について、血液および尿検体を収集した。原因疾患は、代表的な腎不全としてIgA腎症、膜性腎症、微小変化型ネフローゼ症候群、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、ループス腎炎を選択し、小規模試験用検体として疾患毎に十検体程度を収集した。

臨床検体において微量キラルアミノ酸の網羅的、かつ正確な定量を可能とする三次元・四次元HPLC分析を実現するため、新規マーカーとしての可能性が指摘されながら正確な定量が達成されていないトリプトファン、塩基性アミノ酸、システイン、アロイソロイシンおよびアロスレオニンの分析法を検討した。その結果、トリプトファンは光リアクターの利用に加えて移動相組成・流速を検討することで高感度蛍光分析を達成し、アロスレオニンは高分離能光学分割カラムを設計・開発することにより微量分析を達成した。また、トリプトファンは逆相、光学分割にタンデム質量分析を接続した四次元LC/LC/MS/MS装置においても高選択的微量分析を可能とした。塩基性アミノ酸およびアロイソロイシンについては三次元LC/LC/LCのカラムを検討し、塩基性アミノ酸は逆相（疎水性）、逆相（ππ相互作用）、光学分割を各次元とする装置を開発することにより選択的微量分析を実現した。アロイソロイシンは一次元目および二次元目でロイシン連鎖異性体を分離することで選択的微量分析を実現した。併せて、大阪大学医学部腎臓内科と共同で腎生検により原因疾患が判明している中軽度の腎不全患者について、血液および尿検体を収集した。原因疾患は、代表的な腎不全としてIgA腎症、膜性腎症、微小変化型ネフローゼ症候群、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、ループス腎炎を選択し、小規模試験用検体として疾患毎に十検体程度を収集した。