哺乳類体内微量D-アミノ酸分析を基盤とする創薬リード及び疾病マーカーの探索

基于哺乳动物中痕量 D-氨基酸的分析寻找药物发现线索和疾病标志物

基本信息

批准号：
16790036
负责人：
濱瀬健司
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790036/
关键词：
D-アミノ酸光学分割創薬臨床診断機器開発

项目摘要

本研究では哺乳類体内における複数の微量D-アミノ酸について、不斉中心を2カ所有するアミノ酸を含め、これらを二次元-斉分析可能な高感度分析装置を世界に先駆けて開発する。また、様々なD-アミノ酸の組織分布解明を通して機能解析を行う共に、疾病との関連を検討する。本目的達成のため、平成17年度は下記の検討を行った。不斉中心を2カ所有するD-アミノ酸の検討不斉中心を2カ所有するアミノ酸について平成16年度に引き続き検討を行った。生体内でプロリンより生成するヒドロキシプロリンはプロリンの4位が水酸化されており、コラーゲンなどのタンパク質中での存在が多数報告されている。4位水酸基の立体異性によりトランス体とシス体が存在し、それぞれについて光学異性体であるD体とL体がある。この4種の異性体に、D-及びL-プロリンを含めた6種の異性体について二次元一斉分析法を検討した。その結果、Capcell pak C18-MG II(移動相はトリフルオロ酢酸0.02%を含むアセトニトリル水溶液のグラジエント溶離)を一次元目に用いて各アミノ酸を単離した後、二次元目にSumichiral OA-2500Rを用いて光学分割することで上記6種のアミノ酸光学異性体が良好に分析可能となった。D-アミノ酸酸化酵素欠損マウスを用いる局在組織解明上記の分析法を用い、6種のプロリン類縁体について血中含量を測定した。その結果、マウス血漿中においてD-プロリンとL-プロリン、トランス-L-ヒドロキシプロリンの存在が示された。そこで、D-プロリンについて中枢7組織、末梢11組織、血漿及び尿における定量を行った結果、D-プロリン含量は大脳や小脳といった中枢組織では低く、膵臓や腎臓で高いことが示された。また、尿中に極めて多量のD-プロリンが排泄されていることを初めて発見すると共に、この尿中D-プロリンの少なくとも一部は食餌や腸内細菌以外に由来することを示した。これは哺乳類体内においてD-プロリンが生成していることを示唆する重要な発見である。

在这项研究中，我们将是世界上第一个开发高度敏感的分析仪，能够对哺乳动物中的多种痕量D-氨基酸进行二维对称分析，包括具有两个不对称中心的氨基酸。另外，通过阐明各种D-氨基酸的组织分布进行功能分析，将检查与疾病的关联。为了实现这一目标，在2005年进行了以下考虑。对拥有两个不对称中心的D-氨基酸的研究，我们继续研究2004年拥有两个不对称中心的氨基酸。在体内生产的羟基丙烯是由proline在体内产生的，在proline及其蛋白质的4th conter proten and prote and conte proten and prote and proten and proten at proten and proten and proten and proten and prote and。由于羟基在第四位的立体异构主义，因此有反式和顺式形式，并且分别存在光学异构体D和L形式。研究了六个同时分析，包括六个异构体，包括D-和L-丙烯。结果，使用Capcell Pak C18-mg II分离每个氨基酸（流动相是在第一个维度中含有0.02％三氟乙酸的乙腈水溶液的梯度洗脱），然后在第二层中使用Sumichiral OA-2500R在上述六次Amino酸中使用Sumichiral OA-2500R进行了光学分辨。使用上述分析方法测量了使用缺乏D-氨基酸氧化酶的小鼠的局部组织阐明六个脯氨酸类似物的血液含量。结果，在小鼠等离子体中显示了D-磷，L-丙烯和反式L-羟基丙烯的存在。因此，在7个中央组织，11个周围组织，血浆和尿液中对D-磷水量的定量表明，诸如大脑和小脑等中央组织中的D-丙烯含量较低，胰腺和肾脏中的含量很高。也是第一次发现尿液中有大量的D-丙烯酸含量被排出，并且尿液中至少有一些D-丙烯液来自饮食和肠道细菌。这是一个重要的发现，表明D-丙啉是在哺乳动物中产生的。