糖鎖長の改変によるヒアルロン酸糖鎖情報の解読

通过修改糖链长度破译透明质酸糖链信息

• 批准号: 14780480
• 负责人: 板野 直樹
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780480/
• 关键词: 糖; 糖鎖情報; ヒアルロン酸; ヒアルロン酸合成酵素; 遺伝子改変

ヒアルロン酸糖鎖長の決定に関わる機構の解明と、生体内における糖鎖情報の解読を目的に、昨年度に引き続いて、ヒアルロン酸合成酵素HAS2の変異酵素を作製して生化学的解析を行った。その結果、昨年度同定したヒアルロン酸糖鎖長の決定に重要なアミノ酸への変異が、酵素の動力学的特性に影響を及ぼすことを明らかにした。また本年度はHAS2の変異遺伝子を用いて以下の手順によりノックインマウスの作製を試みた。HAS2触媒ドメイン内の糖鎖長決定領域にアミノ酸置換を有する変異合成酵素遺伝子を構築した。ゲノム遺伝子ライブラリーよりHAS2ゲノム遺伝子の一部を含む全長約20kbの領域をクローニングした。そして正常遺伝子を構成する一部のエクソンを変異遺伝子で置換したノックインコンストラクトを作製した。このコンストラクトをES細胞に遺伝子導入し、相同組み換えによって正常遺伝子と変異遺伝子が置換した細胞をPCR法により選別した。変異遺伝子の導入が正常に行われたことをサザンブロット解析により確認した後、そのES細胞を用いて定法によりノックインマウスの作製を行った。その結果、キメラマウスの作出に成功したものの何らかの原因により生殖細胞への変異遺伝子の移入が起きていなかった。従ってヘテロマウス以降の解析が困難となったため、再度ES細胞から相同組み換え体をスクリーニングし、その細胞の樹立を待ってノックインマウスの作製を継続して試みる予定である。

It is decided that the sugar and acid synthesis enzyme HAS2 enzyme should be used to analyze the biochemical analysis of the biochemistry. The results of the experiment, the determination of important enzymes, the effects of the kinetic properties of enzymes on the properties of enzymes and their effects on the properties of enzyme dynamics were determined in the same year. Please use the following manual to make an attempt for this year's HAS2. In the field of HAS2 catalyst, the growth of glucose is determined by the presence of biosynthetic enzymes. I don't know. I don't know. I don't know. I don't know how to make a movie. I don't know. I don't know. Do not change the number of ES cells. In the same group, you can use the PCR method to select the correct number of users. After entering the "normal" line, which is called "normal", the ES cell uses the "normal" method to verify that the data is not valid. The results show that the reproductive system has been moved into the reproductive system because of the reasons for the success. In order to solve the problem, we need to ES the same system again. We need to make sure that the same system is in the same condition.

项目成果

板野直樹, 木全弘治: "転移と細胞外マトリックス"日本臨床(増刊号:癌転移-基礎と臨床アップデート). 61. 111-115 (2003)

Naoki Itano、Hiroharu Kimata：“转移和细胞外基质”日本临床（特刊：癌症转移 - 基础知识和临床更新）61. 111-115 (2003)。

Naoki Itano: "Abnormal accumulation of hyaluronan matrix diminishes contact inhibition of cell growth and promotes cell migration"Proc Natl Acad Sci U S A. 99. 3609-3614 (2002)

Naoki Itano：“透明质酸基质的异常积累减少了细胞生长的接触抑制并促进细胞迁移”Proc Natl Acad Sci U S A. 99. 3609-3614 (2002)

Yoichi Yamada, Naoki Itano, et al.: "Elevated transcript level of hyaluronan synthase1 gene correlates with poor prognosis of human colon cancer."Clin.Exp.Metastasis. in press. (2004)

Yoichi Yamada、Naoki Itano 等人：“乙酰透明质酸合酶 1 基因转录水平升高与人类结肠癌的不良预后相关。”Clin.Exp.Metastasis。

Naoki Itano, et al.: "Selective expression and functional characteristics of three mammalian hyaluronan synthases in oncogenic malignant transformation."J.Biol.Chem.. in press. (2004)

Naoki Itano 等人：“三种哺乳动物乙酰透明质酸合酶在致癌性恶性转化中的选择性表达和功能特征。”J.Biol.Chem.. 正在出版。

板野直樹: "ヒアルロン酸リッチマトリックスと線維化"現代医療. 35. 51-56 (2002)

Naoki Itano：“富含透明质酸的基质与纤维化”现代医学 35. 51-56 (2002)。