糖鎖情報を利用したがん幹細胞マーカーの探索と腫瘍標的システム

利用聚糖信息搜索癌症干细胞标记物和肿瘤靶向系统

基本信息

批准号：
19659144
负责人：
岡田尚巳
金额：
$ 1.98万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

幹細胞への外来遺伝子の導入に必要な諸条件を検討した。この際、骨髄由来間葉系幹細胞を標的細胞として用い、幹細胞のマーカーとして、CD271に着目した。CD271は神経成長因子受容体(NGFR)であるが、未分化性を維持させる分化制御因子としての作用を有する。間葉系幹細胞として、イヌ骨髄液から磁気ビーズ法によりCD271陽性分画を回収し、この細胞集団が高い増殖性と未分化性を維持していることを確認した。また、前年度開発した相同組換えを応用したアデノウイルスゲノム上への外来遺伝子挿入技術を応用し、筋分化誘導因子であるMyoD発現ベクターを構築した。このベクターを分化誘導スイッチとして用い、間葉系幹細胞で一過性にMyoDを強制発現することにより、簡便な細胞分化誘導方法を確立した。この際、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤を併用することによって、分化誘導効率が改善できることを見出した。まず、分化誘導細胞をマウス骨格筋に移植し、移植細胞の生着を確認した。同時に、炎症制御因子IL-10を局所的に作用させると移植効率が向上することを確認した。さらに、ビーグル犬を用いて同種移植を実施した。リンパ球抗原の一致した個体間でドナーとレシピエントを選定し、分化誘導因子遺伝子を導入したドナー由来細胞をレシピエントの前肢および後肢に局所移植したところ、移植細胞は移植領域に3ヶ月間にわたり生存・生着していることが確認できた。生着細胞は筋線維様の形態を示しており、分化マーカーの発現様式から組織再生過程にあることが示唆された。

检查了将外源基因引入干细胞所需的各种条件。目前，将骨髓来源的间充质干细胞用作靶细胞，CD271被重点作为干细胞标记。 CD271是一种神经生长因子受体（NGFR），但它是维持其不分化的分化调节剂。作为间充质干细胞，通过磁珠从犬骨髓液中收集CD271阳性馏分，证实了该细胞群保持高度增殖和未分化。此外，MyOD表达矢量是一种肌肉分化诱导剂，是通过将去年开发的外国基因插入技术应用于腺病毒基因组中的，该基因组应用了同源重组。使用该载体作为分化诱导开关，通过强行表达间充质干细胞中的MYOD来确定诱导细胞分化的简单方法。目前，发现通过组合使用组蛋白脱乙酰基酶抑制剂来提高分化诱导的效率。首先，将诱导分化的细胞植入小鼠骨骼肌中，并确认移植细胞的植入。同时，我们确认炎症控制因子IL-10的局部作用提高了植入效率。另外，使用小猎犬狗进行同种异体移植。在具有匹配淋巴细胞抗原的个体中选择了供体和接受者，并将供体衍生的细胞已在局部移植到受体的前孔和后肢中，并确认在移植的区域中存活并雕刻了三个月的移植细胞。雕刻的细胞表现出肌原纤维样形态，分化标记的表达模式表明它们处于组织再生过程中。