权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

補助刺激分子のシグナル伝達機構の構造生物学的研究

共刺激分子信号转导机制的结构生物学研究

基本信息

批准号：
14704063
负责人：
池水信二
金额：
$ 15.14万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

ナイーブT細胞の成熟には、主要組織適合抗原(MHC)/T細胞受容体(TCR)複合体を介した抗原特異的なシグナルとB7/CD28複合体を介した補助刺激と呼ばれる抗原非特異的なシグナルの両方が必要である。我々は、前者のシグナル関わる分子として、MHCクラス2(Nature Immunology,2002),LEA-3(Proc.:Natl.Acad.Sci.USA,1999)の構造解析を行った。また後者の補助刺激の構造を基にした知見を得るため、B7-1細胞外ドメインの構造(Immunity,2000)、及びB7-1/CTLA-4複合体の結晶構造(Nature,2001)を明らかにした。TCR及びCD28を介する両シグナルの存在下では、IL-2とIL-2受容体(R)の発現が誘導されT細胞が増殖する。補助のシグナル伝達機構、及びIL-2とIL-2Rの認識機構の構造を基にした解明を計画した。CD28を介するシグナル伝達に関わるGadsの結晶構造解析を目的とした発現系の構築を行った。His-tag修飾したGadsをNiカラムで精製後、mono-Qを用いたイオン交換クロマトグラフィーにより精製した。精製したGadsを用いて結晶化条件の検索を行い、針状の微結晶を得た。現在、結晶化条件の最適化を行っている。IL-2Rは、α,β,γの3種のサブユニットから構成されている。この中で、βとγ鎖がシグナル伝達に関わっているが、重度に糖修飾を受けているいることから、結晶構造解析に適した蛋白質を得難い。そこでendO_H感受性の蛋白質を産生するLec3.2.8.1細胞を用いて安定発現株の構築を行った。IL-2Rβに関しては高発現株のセレクションを終え、現在大量培養を行っている。IL-2Rγに関しては高発現株のセレクションを、現在行っているところである。

In the maturation of T cells, the main tissue-adapted antigen (MHC)/T cell receptor (TCR) complex mediates antigen-specific and B7/CD28 complex mediates complementary stimulation and calls for antigen-non-specific treatment. MHC-2(Nature Immunology,2002),LEA-3(Proc.: Natl. Acad. Sci. USA, 1999). The structure of the B7-1 extracellular matrix (Immunity,2000), and the crystal structure of the B7 -1/CTLA-4 complex (Nature,2001) are also described. The expression of IL-2 and IL-2 receptor (R) in the presence of TCR and CD28 induced T cell proliferation. The basic structure of IL-2 and IL-2R recognition mechanism is proposed. CD28 crystal structure analysis and development system construction His-tag modification Gads Ni Refined Gads are obtained by crystallization conditions and needle-like microcrystals. Optimization of crystallization conditions is carried out. IL-2R, α,β and γ are three kinds of receptors. In this case, the β-and γ-chains are closely related to the protein structure, and the protein structure is closely related to the sugar modification. The construction of stable development plants using Lec3.2.8.1 cells for the production of endO_H sensitive proteins IL-2R β is involved in the production of high-yield strains, and is now cultured in large quantities. IL-2R γ is related to high production plant, and now it is in the middle of production.