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ツメガエル減数分裂周期及び卵割体細胞周期におけるMyt1活性制御機構の解析

爪蟾减数分裂周期和卵裂体细胞周期Myt1活性调控机制分析

基本信息

批准号：
03J07980
负责人：
井上大悟
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1、Myt1の不活性化に関わるリン酸化部位の同定前年度では、Plx1キナーゼがMyt1キナーゼと結合し、かつ不活性化することを示した。しかし、Plx1がMyt1のどの部位をリン酸化することで、Myt1を不活性化するかは明らかになっていなかった。今回、Plx1のリン酸化モチーフであるAsp/Glu-X-Ser/Thr(D/EXS/T;Xは任意のアミノ酸)を指標にしてMyt1中のPlx1のリン酸化モチーフをアラニンに置換することで、Plx1によるMyt1の不活性化部位の同定を試みた。そして、Myt1のC末端制御領域にある5つのPlx1のリン酸化モチーフが、M期でのMyt1のリン酸化に関わっていることを示唆した。実際、これら5つの部位を全てアラニンに置換したMyt1-5Aは、in vitroおよびin vivoにおいてPlx1によるMyt1のリン酸化が著しく抑えられた。このことは、Myt1-5AがPlx1による抑制を受けていないことを示唆した。しかしながら驚くべきことに、in vitroにおいてPlx1は依然、Myt1-5Aを野生型Myt1と同程度に抑制しうることが示された。これらの結果は、Plx1によるMyt1の不活性化にさらに別のリン酸化部位が必要であることを強く示唆した。2、Myt1の膜貫通領域の生理的意義Myt1はC末端に膜貫通領域を持つ。この領域が、Myt1の活性にどのように関与しているかは全く分かっていない。最近、Myt1がM期でのゴルジ体の膜小胞化に関与することが示唆された。そこで、Myt1の膜貫通領域を欠失させたMyt1変異体を作成し、卵減数分裂および卵割期における細胞周期の影響を調べた。その結果、野生型Myt1と比べ、膜欠失型Myt1変異体では、卵減数分裂進行と卵割のM期進行の遅れが観察された。さらに、^<35>S-メチオニンラベルの実験および卵抽出系を用いたin vitroの解析から、この遅れは、Myt1のキナーゼ活性によるものではなく、膜タンパクのM期における分散が抑制された結果であることを示唆した。すなわち、Myt1のキナーゼ活性のみならず、膜貫通領域も細胞周期制御に重要であることを強く示唆した

1. The inactivation site of Myt1 and the acidification site of Myt1 are the same as those of the previous year and Plx 1キナーゼがMyt1キナーゼとcombinationし,かつ inactivationすることをshowした.しかし, Plx1 がMyt1 のどのpart をリン acidification することで, Myt1 を inactivation するかは明らかになっていなかった. This time, Plx1 のリン acidified モチーフであるAsp/Glu-X-Ser/Thr (D/EXS/T;てMyt1's Plx1 acidified モチーフをアラニンに replacement することで, Plx1's inactivated part of Myt1's の Same setting を trial みた.そして、Myt1のC terminal control field にある5つのPlx1のリンacidificationモチーフが, M phase でのMyt1 のリン acidification に关わっていることをshows した.実记、これら5つのpartを全てアラニンにreplacementしたMyt1-5Aは、in vitroおよびin VivoにおいてPlx1によるMyt1のリンacidificationが出しく suppressesえられた.このことは、Myt1-5AがPlx1による inhibits けていないことをshows instigation. The Plx1 Plx1 is still active in vitro, and the wild-type Myt1 of Myt1-5A is inhibited to the same extent.これらのRESULTSは、Plx1によるMyt1の inactivation にさらに不のリンacidification site がnecessary であることをSTRONG くSHOW した. 2. The physiological significance of the membrane penetration domain of Myt1 is that the C terminus of Myt1 maintains the membrane penetration domain.この区が, Myt1のActivityにどのように关 and しているかは全く分かっていない. Recently, the M stage of Myt1 has been carried out and the membrane cells have been transformed into small cells.そこで, Myt1's membrane penetration field is not lost, Myt1's allogeneic body is made, and egg meiosis is cut, and the influence of cell cycle is adjusted.その results, wild-type Myt1 ratio, membrane-deficient Myt1 allogene, ovulation meiosis progress, and egg cut at the M stage are carried out.さらに、^<35>S-メチオニンラベルの実験および Egg Extraction System を用いたin in vitro analysis, analysis, and activity of Myt1なく, film タンパクのM phase における dispersion が suppress された results であることをshow instigation した.すなわち、Myt1のキナーゼActivity のみならず、Cell cycle control in the membrane penetration field is important であることをSTRONG くSHOW した