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分子認識能を持つDNAを利用した一塩基多型(SNPs)の簡便検出法の開発

使用具有分子识别能力的DNA开发单核苷酸多态性（SNP）的简单检测方法

基本信息

批准号：
15750070
负责人：
矢野和義
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、three-way junction構造を含むDNAと胆汁酸類の一種であるコール酸が結合すること、three-way junctionの分岐点上の一塩基が別の塩基に置き換えられるとその親和性が減少・消失することを利用して、新しいSNPs検出法の開発を行ってきた。昨年度まではBIAcoreを用いたSNPs検出法を構築してきたが、BIAcoreでは多サンプル同時測定が不可能であるという欠点があった。そこで最終年度では、本検出系をマイクロプレート上に展開し蛍光強度測定を行うことにより、多サンプル同時測定の系を確立することを目的とした。初めに、一本鎖でthree-way junction構造を形成するビオチン標識CH-16-40-18Gを、ストレプトアビジンでコーティングした96穴マイクロプレートに固定化した。これとオレゴングリーン標識されたコール酸とを反応させることによって、SNPsのタイピングが行えるか評価した。その結果、まず緩衝液中の塩濃度を増加させることにより蛍光強度が増加することを確認した。また、この条件を用いてHLA多型における一塩基変異検出を行った結果、パーフェクトマッチとミスマッチとの間に蛍光強度の差があることを確認した。さらに、実試料からのSNPs検出を想定し、二本鎖target DNAを熱変性しプローブDNAとthree-way junction構造を形成させて一塩基変異検出を試みたところ、同様にパーフェクトマッチとミスマッチとの蛍光強度の差を認めることができた。

In this study, three-way junction has developed a kind of chemical acid containing DNA bile acid, which is combined with each other in the classification point of three-way junction. In this study, we have developed a new method for the use of bile acid, and a new SNPs method has been developed to improve the safety and safety of human bile acid. Last year, the BIAcore used the SNPs method to determine that it was impossible to check the number of outstanding points at the same time. In the latest year of the year, we are responsible for the opening of the light intensity measurement system, and the multi-sensor system at the same time to make sure that the light intensity measurement system is accurate. The first book and a book of three-way junction were created to form the title CH-16-40-18G, which is known as "immobilization". Please tell me that you are not aware of the problem, and that you are not aware of the problem. You may have a problem with SNPs, and you will not be able to do so. The results show that the temperature in the solution increases the intensity of light intensity and confirms the intensity of light. In this paper, we use the HLA polymorphisms to display the results of the operation, and to confirm the difference of light intensity in terms of light intensity. In this paper, we use the SNPs to make a decision, an ordinary university, an ordinary university, an ordinary university