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分子進化工学を用いた環境調和型水素生産システムの開発

利用分子进化工程开发环保制氢系统

基本信息

批准号：
08780521
负责人：
矢野和義
金额：
$ 0.7万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780521/
关键词：
大腸菌水素ヒドロゲナーゼ分子進化工学 hypF 調節タンパク質

项目摘要

本研究では、大腸菌内で水素生産に関与するタンパク質の役割を決定し、さらに分子進化工学を駆使することによってこれらを改変・進化させて、環境に負荷を与えない効率的な水素生産プロセスを構築することを目的としている。大腸菌はhypFと呼ばれる調節遺伝子を有し、ヒドロゲナーゼの酵素活性はHYPFタンパク質により厳密に制御されているが、実際の機能に関してはまだ詳細な検討がなされていない。そこで特に今年度は、hypFを高発現用ベクターに組み込んでHYPFの大量発現系を確立し、その機能を解析することを目的とした。すでにクローニングし塩基配列が明らかになっているhypF遺伝子を高発現用ベクターpT7-7に連結した。構築されたプラスミド(pTHA29)を用いて大腸菌BL21(DE3)を形質転換し37度で振とう培養した。そして600nmでの吸光度が0.5〜0.7になったところでイソプロピルチオガラクトピラノシドを最終濃度1mMになるように添加し、HYPFの発現を誘導した。この結果、分子量約80kDのところにタンパク質の発現が誘導されていることがSDS-アクリルアミドゲル電気泳動によって確認された。引き続き塩析、陰イオン交換クロマトグラフィー、およびゲル濾過を行うことによって、このタンパク質をほぼ精製することができた。今後はこの組み換えタンパク質を用いて、大腸菌内における生理的機能を明らかにする。

The purpose of this study is to determine the effect of chemical engineering on the production of water in bacteria, the chemical engineering of bacteria, the improvement of environmental pollution and the rate of environmental pollution. The hypF system is very sensitive, the enzyme activity is very high, the activity of the enzyme is very high, the activity of the enzyme, the activity of the enzyme, the enzyme activity, the enzyme activity, the enzyme activity In the current year, hypF high-level information systems have been used to ensure that a large number of HYPF systems have been established, and that the purpose of the system has been analyzed. Please specify that you need to use the pT7-7 link to specify that you are going to use hypF. The fungus BL21 (DE3) was used to shake 37 degrees in the form of a 37-degree vibrator (pTHA29). The absorbance of the 600nm is 0.50.7. The absorbance is 0.50.7. The most sensitive 1mM is added, and the HYPF wizard is displayed. The results show that the molecular weight is about 80kD, and the molecular weight is about 50%. The molecular weight is about 50%. The results show that the molecular weight is about 50%. The results show that the molecular weight is about 50%. The molecular weight is about 80kD. Please tell me that you need to know that you need to know that you are not in the market. In the future, we will be able to determine the physiological function of the bacteria in the laboratory.