权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

トランスフェリンによるアルミニウムイオン結合の構造機構

转铁蛋白结合铝离子的结构机制

基本信息

批准号：
15780072
负责人：
水谷公彦
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度に引き続き、アルミニウム結合型オボトランスフェリン全分子のX線結晶構造解析を行った。SPring-8のビームラインBL38B1でX線回折データの収集を行った結果、2.15Åの分解能で、R_<sym>=8.1%の良好なデータが得られた。昨年度得られた2.5Åのモデルをさらにモデリングしリファインメントを繰り返した結果、2.15Åの分解能で、Rファクター=20.6%のモデルが得られた。アルミニウムイオン結合型トランスフェリンは、鉄イオン結合型とほぼ同様の全体構造を取っていた。また、アルミニウムイオンは鉄イオンと同様にNおよびCローブのドメイン間のクレフトに、4つのアミノ酸配位子および炭酸イオンを介して結合していた。この非常によく似た構造により、アルミニウムイオン結合型トランスフェリンとトランスフェリンレセプターとの結合が可能となり、トランスフェリンがアルミニウムイオンの輸送に係わっていることが示唆された。昨年度、トランスフェリン遺伝子をヒトの分泌シグナルとともにメタノール資化性酵母(Pichia pstoris)に導入したが、タンパク質の分泌発現が確認できなかったため、シグナルを酵母のフェロモン由来のものに換え同様の実験を行った。その結果、トランスフェリンは培地中に大量に分泌され容易に精製可能であった。分子量測定、N末端分析、円偏向二色性スペクトル測定などを行った結果、組換えタンパク質は天然のものと同様の一次構造、二次構造を保持していることが明らかになった。また、糖鎖は天然のものと異なり、酵母に一般的なハイマンノース型の糖鎖であることが明らかとなった。この糖鎖はEndo-H酵素により、天然の構造を取ったまま容易に切断可能であり、X線結晶構造解析に適したサンプルの調整が可能となった。

Last year, the X-ray crystal structure analysis of the entire molecule of the and combined type Otonitronsen Fünchen was carried out. SPring-8 and BL38 B1 X-ray reflection data collection results, 2.15 resolution energy, R_<sym>=8.1% good data collection results Last year, we got 2.5 percent of the total energy, 2.15 percent of the total energy, and 20.6 percent of the total energy. All the structures of iron and steel are selected according to the structure of the iron and steel combination type. In addition to the above, it is also possible to combine iron and carbon atoms in the same way as N and C atoms. This is a very similar structure. It is possible to combine the structure and the transmission system. Last year, the introduction of Pichia pstoris, the secretion of Pichia pstoris and the origin of Pichia pstoris were confirmed. The result is that it is easy to refine the secretion in large quantities. Molecular weight determination, N-terminal analysis, partial dichroism, determination, results, composition, quality, similarity, primary structure, secondary structure, retention, etc. The sugar lock is natural and different, and the yeast is common. The sugar chain is endo-H enzyme, natural structure is easy to cut off, X-ray crystal structure is easy to adjust