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小脳興奮性シナプスの発達期可塑性におけるカルシニューリンの役割

钙调神经磷酸酶在小脑兴奋性突触发育可塑性中的作用

基本信息

批准号：
15790130
负责人：
柿澤昌
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度は、内因性カルシニューリン阻害薬の慢性投与により、カルシニューリンの小脳登上線維-プルキンエ細胞シナプスの発達・除去への関与を示唆する結果を得た。引き続き、今年度は、時期・部位特異的にカルシニューリンの作用を阻害し、登上線維シナプス発達・除去への影響を調べることを試みた。このため、様々なウィルスベクターを用いて、外因性遺伝子を小脳プルキンエ細胞あるいは登上線維に導入する系の立ち上げを行った。先ず、小脳皮質に蛍光蛋白の一種、GFP遺伝子を持ったウィル液を微小ガラス管を用いて注入し、1日-1ヶ月後に小脳スライス標本を作製し、GFPを発現しているプルキンエ細胞に対して、形態学的・電気生理的解析を行った。その結果、Sindbisウィルスを用いてGFP遺伝子を導入した場合、ウィルス液注入後、24時間以内に、高レベルの発現が見られた。しかし、24時間を過ぎると、プルキンエ細胞に形態学的異常が認められた。これは、ウィルス毒性によるものと思われ、Sindbisウィルスによる遺伝子導入により、数日間以上にわたるシナプス発達・除去への影響を調べることは、困難であることが示された。一方、Lentiウィルスを用いると、ウィルス液注入後、4-7日でGFPの発現が見られる。そして、注入後1ヶ月を過ぎても、外因性遺伝子を導入されたニューロンに、形態的・機能的異常は認められなかった。現在、さらに条件の最適化を行っているところである。また、内因性カルシニューリン阻害薬により、小脳プルキンエ細胞に入力する興奮性線維の基本的な電気生理学的性質には影響が見られなかったが、ある種のシナプス可塑性に対する影響を調べたところ、阻害効果が確認された。

Last year, the results of chronic injection of endogenous drug resistance, drug resistance and small cell growth, removal of drug dependence and drug resistance were obtained. This year, the year, the time, the site-specific role of the media to prevent damage, to enhance the quality of the media to remove the impact of the media to try This is the first time that we've had a chance to do this. First, a kind of GFP gene was injected into the micro-cortex, and then the micro-cortex was produced after 1 day to 1 month. The morphological and electrophysiological analysis of GFP gene was carried out. Results: When GFP gene was introduced into the cell, the expression of Sindbis protein was observed within 24 hours after injection. 24 hours later, the morphological abnormalities of the cells were identified. For example, if you want to use a computer, you can use a computer. After injection, GFP appeared on the 4th to 7th day. 1 month after injection, exogenous genes are introduced, morphological and functional abnormalities are recognized. Now, the conditions are optimized. The effects of intrinsic, intrinsic, and intrinsic factors on the basic electrophysiological properties of excitatory line-dimensions and cell entry forces are recognized.