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DNA損傷におけるがん細胞のアポトーシス誘導制御と機能解析

癌细胞凋亡诱导的控制和 DNA 损伤引起的功能分析

基本信息

批准号：
15790163
负责人：
吉田清嗣
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790163/
关键词：
アポトーシス DNA損傷プロテオミクスキナーゼがん細胞 c-Abl PKCδ Lyn リン酸化

项目摘要

抗癌剤によって活性化されアポトーシスを誘導するキナーゼ群について、その細胞周期やアポトーシス誘導における役割を明らかにするために、キナーゼcDNAにタグを挿入し、細胞に発現させた後、LC-MS/MSによるプロテオーム解析にて複合体を単離した。c-AblチロシンキナーゼとプロテインキナーゼCδ(PKCδ)について複合体の同定並びに解析を進め、その中で両方のキナーゼに共通の基質となるhRad9について機能解析を行った。hRad9は分裂酵母Rad9のヒトホモローダであり、細胞周期チェックポイント機構を担うと考えられている核蛋白である。またBcl-2/xLと会合し、アポトーシスを誘導することが明らかにされたが、その制御機構は不明であった。申請者はまずc-AblがRad9と結合し、BH-3 like domainのチロシンをリン酸化することを見い出した。またこのリン酸化がBcl-2/xLとの会合に必要であり、かつアポトーシス誘導に必須であることを明らかにした。次に、Rad9の恒常的かつDNA損傷で誘導されるリン酸化を担う主要なキナーゼとしてPKCδを同定した。PKCδによるリン酸化はRad9-Hus1-Rad1複合体形成に必要であり、またPKCδの活性阻害による脱リン酸化状態のRad9ではもはやBcl-2と会合できないことを示し、PKCδによるアポトーシス誘導のメカニズムの一端が明らかとなった。さらに種々の手法を用いてこれらのキナーゼの細胞内局在を調べたところ、DNA損傷に伴って核に移行することを見い出した。核への移行はキナーゼの活性化依存的かつアポトーシス誘導に必須であり、あるがん細胞ではこの核移行が阻害されていることを明らかにした。またこの核移行機能不全が薬剤耐性獲得に関わっているという可能性を示唆する結果を得ており、現在より詳細なメカニズムを明らかにしようと試みている。

The anti-cancer drugs were activated, the cells were activated, and the cell cycle was detected. The cell cycle was detected in the population, the cell cycle was detected, the cDNA was detected, and the cells were isolated. After the cancer was detected, the LC-MS/MS complex was analyzed and isolated. In the c-Abl system, we need to know that the C δ (PKC δ) complex is the same and analyze the progress. In the middle of the experiment, we need to share the same information on the hRad9 machine. HRad9 cleavage yeast, Rad9 yeast, cell cycle, nucleoprotein, nucleoprotein. The Bcl-2/xL will rendezvous, and the command will inform you that it will be clear that the control and control agencies will not know what to do. Applicants are required to apply c-Abl