機能プロテオミクス解析によるDNA損傷誘発性がん細胞死の制御機構の解明

通过功能蛋白质组学分析阐明DNA损伤诱导癌细胞死亡的控制机制

• 批准号: 15024222
• 负责人: 吉田 清嗣
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024222/
• 关键词: がん細胞; アポトーシス; DNA損傷; プロテオミクス; c-Abl; PKCδ; Lyn; リン酸化

がん細胞では細胞死(アポトーシス)を含む様々な細胞内シグナル伝達に異常があることが知られており、このメカニズムの解明によりがん治療における新たな標的因子の同定や、がん選択的な治療法開発への貢献が期待される。我々はDNA損傷によるc-Abl、Lyn、PKCδといったキナーゼ群のアポトーシスシグナルでの役割を、主にそのリン酸化によって制御される分子の同定を準じて明らかにしてきた。本研究ではこれらキナーゼ群のアポトーシス誘導機構を網羅的に解明する端緒として、これらの複合体構成因子の単離を目的としたLC-MS/MS(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry)によるプロテオミクス解析を遂行した。c-AblとPKCδについては複合体の同定並びに解析が進行中であり、その中で両方のキナーゼに共通の基質となるhRad9については機能解析が終了した。hRad9はアポトーシスを誘導するが、その制御機構は不明であった。我々はまずc-AblがRad9と結合し、チロシン残基をリン酸化することを見い出した。またこのリン酸化がBcl-2/xLとの会合に必要であり、かつアポトーシス誘導に必須であることを明らかにした。次に、Rad9の恒常的かつDNA損傷で誘導されるリン酸化を担う主要なキナーゼとしてPKCδを同定した。PKCδの活性阻害による脱リン酸化状態のRad9ではBcl-2と会合できないことを示し、PKCδによるアポトーシス誘導のメカニズムの一端が明らかとなった。さらに、種々の手法を用いてこれらのキナーゼの細胞内局在を調べたところ、DNA損傷に伴って核に移行することを見い出した。核移行はアポトーシス誘導に必須であることから、現在上記のプロテオーム解析で複合体構成因子として単離されたいくつかの分子について、この核移行に関わるタンパク質群を同定し機能解析を進めている。

The contribution of new target factors to the development of therapeutic methods is expected. The DNA damage caused by c-Abl, Lyn, PKCδ and the molecular identity of the host cell were investigated. In this study, the analysis of complex components in Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) was carried out. c-Abl δhRad9 is not clear. I've got a c-Abl-Rad9 binding, a C-Abl-Rad9 binding, a C-Abl-Rad 9 binding, and a C-Abl-Rad 9 binding. Bel-2/xL must be activated. Bel-2/xL must be activated. In addition, Rad9's constant DNA damage is induced by acidification, which is mainly caused by PKCδ. PKCδ activity inhibition, inactivation, acidification, Bcl-2, fusion, PKCδ activity inhibition, inactivation, inactivation. In addition, the DNA damage caused by nuclear migration was also detected. The nuclear migration is related to the molecular structure and functional analysis of complex components.

项目成果

Yoshida, K., et al.: "Protein Kinase Cδ is responsible for constitutive and DNA damage-induced phosphorylation of Rad9."EMBO J.. 22・6. 1431-1441 (2003)

Yoshida, K., et al.：“蛋白激酶 Cδ 负责 Rad9 的组成型磷酸化和 DNA 损伤诱导的磷酸化。”EMBO J.. 22・6 (2003)。

Li, Y., et al.: "DF3/MUC1 signaling in multiple myeloma cells is regulated by Interleukin-7."Cancer Biol.Ther.. 2・2. 37-43 (2003)

Li, Y., et al.：“多发性骨髓瘤细胞中的 DF3/MUC1 信号传导受白细胞介素 7 调节。”Cancer Biol. 2・2 (2003)。

吉田清嗣, 三木義男: "癌研究へのゲノム医学の応用"胆と膵. 24・5. 321-326 (2003)

Kiyoshi Yoshida、Yoshio Miki：“基因组医学在癌症研究中的应用”Bile and Pancreas 24・5 (2003)。

Xu, H., et al.: "Regulation of a transient receptor potential (TRP) channel by tyrosine phosphorylation."J.Biol.Chem.. 278・13. 11520-11527 (2003)

Xu, H., et al.：“通过酪氨酸磷酸化调节瞬时受体电位（TRP）通道。”J.Biol.Chem.. 11520-11527（2003）。

Abbas, T., et al.: "Inhibition of human p53 basal transcription by down-regulation of protein kinase C δ."J.Biol.Chem.. 279(in press). (2004)

Abbas, T. 等人：“通过下调蛋白激酶 C δ 抑制人类 p53 基础转录。J.Biol.Chem.. 279（出版中）”。