DNAメチル化インプリンティング確立に寄与する新規蛋白質の網羅的同定

全面鉴定有助于建立DNA甲基化印记的新型蛋白质

• 批准号: 15790173
• 负责人: 秦 健一郎
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790173/
• 关键词: 発生・分化; 遺伝学; ゲノムインプリンティング; DNAメチル化; タンパク質相互作用; 配偶子; 生殖細胞; エピジェネティクス; ゲノム

本研究では、配偶子形成過程におけるインプリンティング遺伝子のDNAメチル化の確立をモデル系に、DNAメチル化機構に普遍的に関わる蛋白質群を同定する事を目的とした。卵子形成過程で確立される母由来DNAメチル化インプリンティングは、確立される細胞とその領域・時期・DNAメチル化酵素以外の必要因子(Dnmt3L)の生理的意義が唯一明らかな系である。そこで、DNAメチル化インプリンティングが確立される限局した時期の特異的細胞(第一次減数分裂前期の未熟な卵細胞)からcDNAライブラリーを作製し、遺伝学的に関与の明らかなDnmt3Lをプローブとしてtwo-hybrid screeningを行えば、効率的なDNAメチル化(インプリンティング)機構制御因子の同定が可能であると予想される。本研究で得られた知見は、DNAメチル化インプリンティング機構の理解に留まることなく、普遍的なDNAメチル化制御機構解明への展開が期待できる。平成15年度は、標的とする因子が特異的に発現していることが予想される、未熟な卵子の大量回収を行った。また、Dnmt3Lの発現ベクター作成を行ったが、既知のmRNA配列に一部欠失が存在することが判明し、発現ベクターの作成に予想外の時間がかかった。Dnmt3Lをおとりタンパク質として行うYeast two-hybrid法のスクリーニングでも、擬陽性により実験系の検討に時間を費やさざるを得なかった。平成16年度には、Dnmt3L cDNA全長を用いたスクリーニングを開始し、すでにいくつかの候補因子を得ることに成功した。特にその中のひとつは、発現パターンからも卵子成熟過程の特定の時期に、Dnmt3Lと協調して機能していることが強く示唆され、今後の展開が期待される。現在これらの候補因子の遺伝学的解析を行う準備を進めている。

This study で は, gamete formation に お け る イ ン プ リ ン テ ィ ン グ posthumous son 伝 の DNA メ チ ル change の establish を モ デ ル に, DNA メ チ ル change institutions に common に masato わ る を protein group with fixed す る matter を purpose と し た. Egg formation で establish さ れ る female origin DNA メ チ ル change イ ン プ リ ン テ ィ ン グ は, establish さ れ る cells と そ の areas, period, DNA メ チ ル phenoloxidase outside の necessary factor (Dnmt3L) の physiological significance が only Ming ら か な department で あ る. そ こ で, DNA メ チ ル change イ ン プ リ ン テ ィ ン グ が establish さ れ る limit bureau し の specific cells た period (the first meiotic prophase の unripe な eggs) か ら cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を に of し, but 伝 masato Ming ら の か な Dnmt3L を プ ロ ー ブ と し て two - hybrid Screening line を え ば, sharper rate な DNA メ チ ル change (イ ン プ リ ン テ ィ ン グ) agency suppression factor の with fixed が may で あ る と to think さ れ る. This study で have ら れ た knowledge は, DNA メ チ ル change イ ン プ リ ン テ ィ ン グ institutions の understand に leave ま る こ と な く, common な DNA メ チ ル system of the royal institution interpret へ の expand が expect で き る. 15 year は pp.47-53, mark と す る factor が specific に 発 now し て い る こ と が to think さ れ る, unripe の な eggs a lot back 収 を line っ た. ま た, Dnmt3L の 発 now ベ ク タ ー made line を っ た が, both known の mRNA with column に lost a owe が exist す る こ と が.at し, 発 ベ ク タ ー の made に to think outside の time が か か っ た. Dnmt3L を お と り タ ン パ ク qualitative と し て line う Yeast two hybrid method の ス ク リ ー ニ ン グ で も, quasi positive に よ り be 験 is の beg に 検 time を や さ ざ る を have な か っ た. Over 16 year pp.47-53 に は, Dnmt3L cDNA を with い た ス ク リ ー ニ ン グ を began し, す で に い く つ か の backup factor を should る こ と に successful し た. In special に そ の の ひ と つ は, 発 now パ タ ー ン か ら も egg maturation の specific に の period, Dnmt3L と coordination し て function し て い る こ と が く and shown strong sucking さ れ, future の launched が expect さ れ る. Now, the を line う of the <s:1> candidate factor for the analysis of cultural heritage 伝 studies is ready for を to enter めて る る.

项目成果

エピジェネティクス

表观遗传学

• 发表时间: 2004
• 作者: Kaneda;M.;et al.;秦健一郎(分担)
• 通讯作者: 秦健一郎(分担)

Hata, K.: "Genomic imprinting : mechanisms, significance and evolution."J.Mamm.Ova.Res.. 20. 64-68 (2003)

Hata, K.：“基因组印记：机制、意义和进化。”J.Mamm.Ova.Res.. 20. 64-68 (2003)

Essential role for de novo DNA methyltransferase Dnmt3a in paternal and maternal imprinting

• DOI: 10.1038/nature02633
• 发表时间: 2004-06-24
• 期刊: NATURE
• 影响因子: 64.8
• 作者: Kaneda, M;Okano, M;Sasaki, H
• 通讯作者: Sasaki, H

Role of de novo DNA methyltransferases in initiation of genomic imprinting and X-chromosome inactivation

• DOI: 10.1101/sqb.2004.69.125
• 发表时间: 2004-01-01
• 期刊: COLD SPRING HARBOR SYMPOSIA ON QUANTITATIVE BIOLOGY
• 作者: Kaneda, M;Sado, T;Sasaki, H
• 通讯作者: Sasaki, H

Gribnau, J.: "Asynchronous replication timing of imprinted loci is independent of DNA methylation, but consistent with differential subnuclear localization."Genes and Development. 17. 759-773 (2003)

Gribnau, J.：“印记基因座的异步复制时间与 DNA 甲基化无关，但与差异亚核定位一致。”基因与发育。