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肺炎クラミジアが分泌する封入体タンパク質の解析と感染症診断への応用に関する研究

肺炎衣原体分泌的包涵体蛋白分析及其在传染病诊断中的应用研究

基本信息

批准号：
15790276
负责人：
堀井俊伸
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は,肺炎クラミジア感染症の検査診断法として,日常診療で利用できる簡便な迅速診断法の開発を目的に展開するものである。検体中の抗原あるいは抗体を免疫学的手法により検出することが可能なアッセイ系を構築しようとするものであり,本年度は,菌株間の多様性がほとんどなく,構造上免疫原性が高いであろうと考えられる封入体膜タンパク質inclusion membrane protein (Inc)ならびに抗主要外膜タンパク質major outer membrane protein (MOMP)に対する抗体や抗基本小体elementary body (EB)抗体を用いて肺炎クラミジア抗原を検出する系を構築し,測定系の感度や特異性をはじめとする種々の評価を行った。本年度は,まず,家兎を用いて作製した抗EB抗体,抗MOMP抗体,抗IncA抗体および抗IncC抗体の精製を行い,immunoblot法などにより抗体の特異性などの免疫学的性質について解析を行った。その結果,抗EB抗体ならびに抗Inc抗体は,抗MOMP抗体に比べて特異性が低く,肺炎クラミジア抗原を免疫学的に検出する系を構築することは困難であることが示唆された。また,肺炎クラミジアを感染させたHEp-2細胞をカルノフスキー液で固定した後,これらの抗体を用いて免疫組織染色法などによる標本を作製して電子顕微鏡下で観察した結果においても,抗Inc抗体ならびに抗EB抗体と肺炎クラミジア封入体との反応性は乏しいものであった。そこで,抗MOMP抗体を用いて肺炎クラミジア抗原を検出するための酵素免疫測定系を構築し,より高感度に肺炎クラミジア抗原を検出することが可能な条件を検討している。

This study aims to develop a simple and rapid diagnostic method for pneumonia infection. Antigens and antibodies in isolates Immunological methods for detection, identification, and possible system construction This year, diversity among strains Structurally, the immunogenicity is high, and the antibody against the major outer membrane protein (MOMP) is the elementary body (EB). Antibodies are used to detect the presence of a specific antigen. This year, we have been preparing anti-EB antibody, anti-MOMP antibody, anti-IncA antibody and anti-IncC antibody by immunoblot method, and analyzing the specificity and immunological properties of these antibodies. As a result, anti-EB antibodies and anti-Inc antibodies are less specific than anti-MOMP antibodies, and it is difficult to construct an immunological system for pneumonia detection. The HEp-2 cells infected with the virus were fixed in the culture medium, and the antibodies were detected by immunohistochemical staining. The results showed that the antibodies against the HEp-2 cells infected with the virus and the antibodies against the EB cells were detected by electron microscopy. Therefore, an enzyme immunoassay system was constructed to detect highly sensitive pneumonia antigens using anti-MOMP antibodies.