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黄色ブドウ球菌が産生する毒素(酵素)の分泌機構に関する研究

金黄色葡萄球菌毒素（酶）分泌机制研究

基本信息

批准号：
11770138
负责人：
堀井俊伸
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine (2000)Nagoya University (1999)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

黄色ブドウ球菌は,腸管毒,TSST-1,コアグラーゼなど様々な毒素(酵素)を産生する.我々は,黄色ブドウ球菌における毒素(酵素)の分泌機構を明らかにするにあたり,多くの黄色ブドウ球菌が産生し,N末端にシグナルペプチドを有する分泌酵素であるスタフィロキナーゼ(SAK)に着目した.まず,スタフィロキナーゼ(sak)遺伝子の遺伝学的背景を明らかにする目的で,MRSANU3-1株からsak遺伝子およびその上・下流域をクローニングし,15600-bpにわたる領域の塩基配列を決定した.その結果,sak遺伝子は,バクテリオファージのゲノムに由来し,バクテリオファージが溶菌するときに必要な細胞壁分解酵素N-acetylmuramyl-_L-alanine amidaseをコードする遺伝子plyのopen reading frameのなかに割り込んで存在していた.このような構造は,6株のMRSAのうち5株に認められた.これら6株において,培養上清中のSakの量は,immunoblottingの結果から同程度であった(Horii T et al.FEMS Microbiology Letters,185:221-224,2000).次に,MRSANU3-1株から,Sec因子のひとつであり,translocation ATPaseサブユニットをコードするsecA遺伝子のクローニングに成功した.secA遺伝子およびその上・下流域を約4-kbにわたり塩基配列の決定を行った.上流域には,secA遺伝子の調節遺伝子であると考えられるgeneX遺伝子が存在していた.さらに,これらのデータをもとにしてgeneX^-のisogenic mutantの作製にも成功した(未発表データ).毒素(酵素)の分泌機構の解析を進めるには,SAK以外にも毒素(酵素)を定量するアッセイ系がいくつか必要であると考えた.そこで,まず,ELISA法によりプロテインAを定量するアッセイ系を構築した.現在,DNaseを定量するアッセイ系を構築しているところである.

Yellow sphaerococcus, intestinal toxin,TSST-1, The secretion mechanism of toxin (enzyme) in yellow cocci is clearly identified, and many yellow cocci are produced. The secretion mechanism of toxin (enzyme) in N terminal is identified. To clarify the genetic background of MRSANU3-1 sak gene, the gene sequence of MRSANU3-1 strain sak gene was determined in the upper and lower watersheds of the 15600-bp region. As a result, the sak gene was found to be present in the open reading frame of the cell wall decomposing enzyme N-acetylmuranyl-L-alanine amidase, which is essential for the lysis of bacteria. 6 strains of MRSA and 5 strains of MRSA. The amount of Sak in the supernatant of the culture medium was reduced to the same extent as the result of immunoblotting (Horii T et al. FEMS Microbiology Letters,185:221-224,2000). Second,MRSANU3-1 strain was successfully identified by secA gene. SecA gene was successfully identified by secA gene. SecA gene was successfully identified by secA gene.SecA gene was successfully identified by secA gene. In the upper basin, the gene A and gene X genes exist. In the meantime, the gene X ^-isogenic mutant has been successfully produced. The analysis of toxin (enzyme) secretion mechanism is necessary for the quantification of toxin (enzyme) other than SAK. The ELISA method was used to construct A quantitative system. Now, the DNase quantification system is constructed.