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MRSAの感染症において毒素産生性の特徴を利用した活動性の評価法の確立

利用MRSA感染产毒特征建立活性评价方法

基本信息

批准号：
13771452
负责人：
堀井俊伸
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

検体より分離されたMRSAが感染症の起因菌であるか常在菌(保菌)であるかを迅速に鑑別する方法(鑑別診断法)を開発することを目的として、黄色ブドウ球菌が産生する酵素の産生量が対数増殖期と静止期で異なるという性質を応用した研究をプロテインAとDNaseを対象に実施した.昨年度までに,プロテインAおよびDNaseを定量するための二抗体サンドイッチ法を利用した酵素免疫測定系を構築し,臨床分離株5株と標準菌株Staphylococcus aureus NCTC8325株の培養上清中に分泌された酵素(プロテインAおよびDNase)を経時的に定量した.その結果,これらの分泌タンパク質は,対数増殖期と静止期で発現量が異なることを確認することかできた.このことは,MRSAにおいて,分泌タンパク質の発現が,agr系(a global regulatory system)の支配によって増殖のフェーズに応じて制御を受けているという性質を反映しているものと考えられた.本年度は,昨年度に構築した酵素免疫測定系の感度を高めるために種々の調整条件の検討を行うとともに,化学発光を利用することにより,感度を10〜100倍上昇させることに成功した.次に,この高感度測定系を利用して,MRSA感染症患者,MRSA非検出患者,健常者に由来する血清および尿検体中に含まれるプロテインAおよびDNaseを定量した.その結果,MRSA非検出患者や健常者の血清中からはプロテインAおよびDNaseが検出されなかったのに対して,MRSA感染症患者の血清中にはプロテインAまたはDNaseの存在が確認された.一方,MRSA感染症患者とMRSA保菌患者に由来する喀痰に対して定量したところ,MRSA保菌患者の喀痰においてはプロテインAおよびDNaseのいずれも検出できなかったのに対し,MRSA感染症患者の喀痰中からはプロテインAまたはDNaseが検出された.これらのことから,本研究において構築したプロテインAおよびDNaseの測定系は,MRSAの活動性評価(感染症か保菌状態の鑑別)のために有用な検査診断法である可能性が示唆された.今後,さらに多くの臨床検体を用いて検討することにより,臨床応用にむけた展開を行う予定である.

A method for rapid identification of the causative bacteria of MRSA infection (differential diagnosis method) was developed. The amount of enzyme produced by MRSA was determined according to the number of bacteria in the growth period and the static period. In the past year, the enzyme immunoassay system was constructed by using the two-antibody assay for the quantification of the enzyme secreted from the culture supernatant of 5 clinical isolates and the standard strain Staphylococcus aureus NCTC8325. As a result, the secretion quality of the protein is different from that of the growth period and the rest period. However, due to the proliferation of MRSA, the discovery of secreted tapanax substances, and the control of agr (a global regulatory system), the nature of agr is reflected in this review. This year, the sensitivity of enzyme immunoassay system was successfully increased by 10 ~ 100 times compared with that of last year. In addition, this high sensitivity assay was used to quantify the presence of MRSA and DNase in serum and urine from MRSA infected patients,MRSA undetected patients, and healthy individuals. As a result,MRSA was not detected in the serum of patients and healthy individuals, and the presence of MRSA was confirmed in the serum of patients infected with MRSA. One side,MRSA infected patients and MRSA protected patients in the origin of the sputum to the quantitative,MRSA protected patients in the sputum to the sputum to the A and DNase in the detection of the A and DNase in the detection of the A and DNase in the MRSA infected patients in the sputum to the A and DNase in the detection of the A. In this study, we constructed an assay system for MRSA activity assessment (identification of bacterial status of infectious disease) and demonstrated the possibility of using diagnostic methods. In the future, there will be many clinical applications for research and development.