前立腺癌におけるアンドロゲン受容体の動態・構造解析

前列腺癌雄激素受体的动态和结构分析

• 批准号: 15790848
• 负责人: 今尾 哲也
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790848/
• 关键词: 前立腺癌; アンドロゲン受容体; androgen receptor; Green Fluorescent Ptotein

前立腺癌においてアンドロゲン受容体(AR)の働きは極めて重要である。我々は、まず、ARの前立腺癌細胞内でのARの局在を調べるために、ARのN末側にEGFP蛋白を融合させた蛋白質を発現させるプラスミドを構築した。当初、ARのN末を30アミノ酸欠失させたARを用いてARの発現および活性をルシフェラーゼアッセイで調べるところであった。しかし、このプラスミドはDHT存在の有無にかかわらず全くPSAのプロモータ活性を全く誘導しなかった。ところが、PSAプロモータの変わりにMMTVプロモータを用いて同様の実験を行うと、MMTVプロモータ活性はDHTにより誘導された。このためさらにN末を欠失させたAR、完全なN末を含むARを発現するプラスミドをPCRにて作成し、PSAプロモータ活性を調べたところ、完全長のARを発現するプラスミドのみDHTによってPSAプロモータ活性が誘導された。以上のことから、ARのN末30アミノ酸の領域にプロモータ特異的に発現を誘導する領域があることが示された。この約30アミノ酸に結合する蛋白質の同定をbacteria-two hybrid法を用いて行うためにbacteriaで30アミノ酸を発現するベクターを作成した。現在、それを用いて可能性のあるクローンを100遺伝子クローン化した。また、できあがった完全長ARを発現するEGFP融合プラスミドをラットの前立腺癌細胞株R3327H-G8-A1にG418を用いて安定導入を試み、ARの蛍光を発する安定導入株を樹立した。

Prostatic gland cancer is very important because of its receptor (AR). I am 々は、まず、ARのprostatic gland cancer cell and the location of でのAR is in を动べるために、ARのThe EGFP protein on the N-terminal side is fused with the protein and the protein is present in the protein. At the beginning, the ARのNlastを30アミノ acid deficiency was lostさせたARを用いてARの発Now the active およびをルシフェラーゼアッセイで调べるところであった.しかし, このプラスミドはDHT presence and absence にかかわらず全くPSA のプロモータActivity を全くinducing しなかった.ところが、PSAプロモータの変わりにMMTVプロモータを用いて Same様の実験を行うと, MMTVプロモータACTIVITY, DHTによりinducing,された.このためさらにNEndを不了させたAR, Complete なNEndを IncludedARを発行するプラスミドをPCRにて成し, PSAプロモータActive をTune べたところ, Full length のAR を発 appear するプラスミドのみDHT によってPSA プロモータActivity が inducing された. The above のことから, ARのN 30アミノ acid の区 にプロモータ specific に発 appear を induced する 区 があることが Show された.このAbout 30アミノacidにbindするproteinの同定をacteria-two The hybrid method is made of いて行うためにbacteria で30アミノ sour を発成するベクターを. Now, use the possibility of using the のあるクローンを100弝子クローン化した.また、できあがったFull-length ARを発成するEGFP fusion プラスミドをラットのprostatic gland cancer cell line R33 27H-G8-A1 and G418 are used for stabilization introduction and testing, and AR's stabilization introduction strain is established.