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ヒト卵子特異的ヒストンH1の同定および受精過程における機能解析

人类卵子特异性组蛋白H1的鉴定及其在受精过程中的功能分析

基本信息

批准号：
15790908
负责人：
田中雄大
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790908/
关键词：
受精核タンパクヒストンマウス卵子

项目摘要

1.ヒト単一卵子からRNAを抽出する方法を確立した。2.マウス卵子特異的ヒストンH1(H1oo)と相同性の高い遺伝子配列をデータベースから推測し、ここからプライマーを作成した。3.このプライマーを用いて、ヒト単一卵子からRT-nested PCRを行い、得られたPCR産物の塩基配列を解析することによって1041bpのopen reading frameを持つcDNAを同定した。4.このcDNAから推測されたアミノ酸配列に対して、データベースからhomology解析を行なった。その結果、このアミノ酸配列は他動物種の卵子特異的ヒストンH1ときわめて相同性が高く、更に内部にcentral globular domainといわれる卵子特異的ヒストンH1に共通の構造を有していることが分かった。5.RT-nested PCRによって、このcDNAはヒト各種臓器(肺、肝臓、乳房、脾臓、腎臓、小腸・筋肉組織、リンパ球)には存在しないことを確認した。6.以上よりこのcDNAはヒト卵子特異的ヒストンH1であると考えられ、これをhuman oocyte specific histone H1 : osH1と命名し、GeneBankに登録するとともに、別記の如く、学会誌に発表した。7.osH1全長のうち、30アミノ酸残基をepitopeとして家兎より、抗osH1 polyclonal antibodyを作成した。8.このpolycolona抗体を用いて、ヒト卵子およびヒト卵巣に対して免疫組織染色を行い、osH1タンパクの卵子特異的発現を確認した。9.現在、ヒト単一卵子中のosH1 mRNAの定量化を検討中である。

1. The method for extracting RNA from eggs was established. 2. The egg specific gene H1(H1oo) is identical to the gene sequence. 3. The PCR products were analyzed by RT-nested PCR, and the cDNA sequences were determined by open reading frame of 1041bp. 4. The cDNA fragments were predicted to be homologous to each other. As a result, the sequence of amino acids is similar to that of ovum specific H1 of other animal species, and the common structure of ovum specific H1 is similar to that of central global domain. 5.RT-nested PCR was used to detect the presence of cDNA in various organs (lung, liver, breast, spleen, kidney, small intestine, muscle tissue, and kidney). 6. The above cDNA sequences are described in detail in the following paragraphs: Human oocyte specific histone H1 : osH1, GeneBank, and GenBank. 7. OsH1 full-length amino acid residues, 30 amino acid residues, anti-osH1 polyclonal antibodies were prepared. 8. The use of polycolona antibodies in the treatment of oocytes and oocytes was confirmed by immunostaining and oocyte specific expression of osH1. 9. Now, quantitative analysis of osH1 mRNA in a single egg is under discussion.