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ジストロフィンmRNA前駆体に結合する新規核タンパクに関する分子生物学的研究

与肌营养不良蛋白前体 mRNA 结合的新型核蛋白的分子生物学研究

基本信息

批准号：
13877120
负责人：
松尾雅文
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私たちは、Duchenne型筋ジストロフィーで遺伝子診断を精力的に実施し、ジストロフィンのスプライシング異常を示す多くの例を見出してきた。その中の1部の症例においては、スプライシングに関する古典的な概念で説明できない新しいスプライシング制御機序の存在が示唆された。そこで、私たちは未発見の核タンパクがスプライシングの制御に関与しているものと着想し、その核タンパクの存在について検討し、ジストロフィンmRNA前駆体に結合する新しい核タンパクの精製に成功した。精製した核タンパクのアミノ酸配列をTOF MASを用いて明らかにした。さらに、このアミノ酸配列と一致するタンパクをデータベースより検索した。その結果、mRNAと結合するタンパクとして2種の核タンパクがあることを明らかにした。そのcDNAの全塩基配列が明らかになったので、RT-PCR法を用いてcDNAをクローニングした。クローニングしたcDNA配列を発現ベクターに組み込み、これを大腸菌に導入することにより核タンパクを大量に得た。現在、タンパクのスプライシング反応における意義を明らかにするため、以下の実験を行っている。ジストロフィン遺伝子のミニ遺伝子を作成し、これを^<32>P-ATP存在下で転写させて^<32>PでラベルしたジストロフィンmRNA前駆体を作製する。これとHeLa細胞核抽出液とを混じてIn vitroでスプライシング反応を行う。そして、この系に先に合成した核タンパクをそれぞれ加え、スプライシング反応パターンを解析する。また、既知のタンパクを加えることによりそれぞれのタンパク間の相互作用も解析する。以上からmRNAに結合する核タンパクのスプライシング促進に果たす役割を解明する。

A number of examples of the implementation of the Duchenne model for the diagnosis of genetic abnormalities are presented. A number of examples of this phenomenon illustrate the existence of a novel mechanism for controlling the occurrence of diseases related to classical concepts. In this paper, the author discusses the relationship between the control of the gene and the existence of the gene and the purification of the gene precursor. The best way to improve the quality of the product is to use TOF. In addition to the above, it is also possible to arrange a variety of products in the same way. The results, mRNA and protein binding, and the two kinds of protein binding. The cDNA sequence was mapped to the cDNA sequence using RT-PCR. A large number of cDNA sequences were obtained from E. coli. Now, let's make it clear that the following is the case. The <32>expression of <32>mRNA precursor was studied in the presence of ATP. HeLa cell nuclear extract is mixed with vitro extract. This is the first time I've ever had a problem with this. Analysis of the interaction between the known and unknown elements The above mRNA binding sites promote the expression of gene fragments.