炎症応答の特異性を決定する核タンパク質IκB-ζを介した転写制御機構とその意義

核蛋白IκB-ζ介导的决定炎症反应特异性的转录控制机制及其意义

• 批准号: 11J06972
• 负责人: 有賀 裕二郎
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J06972/
• 关键词: 自然免疫; IκB-ζ; TAB2; 炎症応答

炎症応答において重要な役割を持つ転写制御因子IκB-ζは現在までの研究で、標的遺伝子プロモーター上において、TAB2やHDAC1、HDAC3と結合し、TAB2の分解を介してHDAC1、RDAC3等の転写抑制を解除し、その後の転写活性化を導くという作業仮説が得られた。そこで今回は、既に解析を進めているIκB-ζ依存的転写制御機構におけるプロモーター上のダイナミクスの解析、IκB-ζ発現依存的なTAB2分解機構の解明を行った。プロモーター上のダイナミクスの解析には、IκB-ζ、TAB2、HDAC1、3に特異的な抗体を用い、またポジティブコントロールとしてNF-κB p65サブユニットに特異的な抗体を用いてLipopolysaccaride(LPS)刺激後のRAW264.7細胞のクロマチン免疫沈降を行い、それぞれの因子のIκB-ζ標的遺伝子プロモーターへの動員について、詳細な検討を行った。結果として抗NF-κBp65サブユニット抗体を用いたクロマチン免疫沈降により、LPS刺激後90分後において、一次応答遺伝子群に属し、NF-κB標的遺伝子であるcxcl2遺伝子、またIκB-ζ標的遺伝子であるLcn2のプロモーター上へのp65サブユニットの動員が確認された。しかしTAB2、HDAC1、3に対する抗体を用いた際では、クロマチン免疫沈降による増幅されたバンドが確認されなかった。現在までの報告で、一次応答遺伝子群のプロモーター上において、LPS刺激によるHDAC1、3の動員、解離がおきることが確認されている。よってcxcl2プロモーター上でのLPS刺激によるHDAC1、3の動向が確認できるクロマチン免疫沈降法の実験条件を、使用する抗体の変更も含め、検討する必要がある。現在までの研究でIκB-ζ依存的にTAB2が分解されることが明らかとなっている。リソソーム依存的なタンパク質分解を阻害するNH_4Clで細胞を処理した場合、タンパク量の回復がある程度確認されたため、このIκB-ζ依存的なTAB2の分解はリソソーム依存的におきることが示唆された。今後の解析では、IκB-ζ遺伝子欠損マウス由来の胎生線維芽細胞を活用し、このTAB2の分解へのIκB-ζの関与の確認が必要である。

Inflammation 応 answer に お い て important cut を hold つ な service planning I write suppression factor kappa B - zeta predominate は now ま で の heritage research で, mark 伝 son プ ロ モ ー タ ー on に お い て, TAB2 や HDAC1, HDAC3 と し, TAB2 の decomposition を interface し て HDAC1, RDAC3 の planning write inhibit を remove し, そ の の after planning to write activeness を く Youdaoplaceholder0 う the assignment 仮 says が to られた. そ こ で は back today, both に analytic を into め て い る I kappa B - write zeta dependent of planning system of imperial predominate institutions に お け る プ ロ モ ー タ ー on の ダ イ ナ ミ ク ス の parsing, I kappa B - zeta predominate 発 now dependent な TAB2 decomposition institutions の interpret を line っ た. On プ ロ モ ー タ ー の ダ イ ナ ミ ク ス の parsing に は, I kappa B - zeta predominate, TAB2, HDAC1, 3 に specific antibody を な い, ま た ポ ジ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と し て nf-kappa B P65 サ ブ ユ ニ ッ ト に specific antibody を な with い て Lipopolysaccaride (LPS) stimulation の RAW264.7 cells の ク ロ マ チ ン immune sink を い, そ れ ぞ れ の factor の I kappa B - zeta predominate mark heritage 伝 son プ ロ モ ー タ ー へ の mobilization に つ い て, detailed な 検 line for を っ た. Results と し て resistance nf-kappa Bp65 サ ブ ユ ニ ッ を ト antibody with い た ク ロ マ チ ン immune sink に よ り, 90 points after LPS stimulation に お い て, a 応 a heritage 伝 subgroup に し and nf-kappa B mark heritage 伝 son で あ る cxcl2 heritage 伝, ま た I kappa B - zeta predominate mark heritage 伝 son で あ る Lcn2 の プ ロ モ ー タ ー on へ の p65 Youdaoplaceholder0 サブユニット mobilize が confirm された. し か し TAB2, HDAC1, 3 に す seaborne を る antibody with い た interstate で は, ク ロ マ チ ン immune sink に よ る rights of さ れ た バ ン ド が confirm さ れ な か っ た. Now ま で で の report, a 応 a heritage 伝 subgroup の プ ロ モ ー タ ー on に お い て, LPS stimulation に よ る HDAC1, 3 の mobilization, dissociative が お き る こ と が confirm さ れ て い る. よ っ て cxcl2 プ ロ モ ー タ ー on で の LPS stimulation に よ る HDAC1, 3 の trend が confirm で き る ク ロ マ チ ン の immune sink method be を 験 conditions, using す る antibody の - more も め, beg す 検 る necessary が あ る. Now ま で の research で I kappa B - zeta dependent に predominate TAB2 が decomposition さ れ る こ と が Ming ら か と な っ て い る. リ ソ ソ ー ム dependent な タ ン パ ク qualitative decomposition を resistance against す る NH_4Cl で cells を 処 Richard し た occasions, タ ン パ ク quantity の reply が あ る degree confirmed さ れ た た め, こ の I kappa B - zeta dependent な predominate TAB2 の decomposition は リ ソ ソ ー ム dependent に お き る こ と が in stopping さ れ た. Future の parsing で は, kappa B - zeta but 伝 predominate I owe loss マ ウ ス origin の viviparous line d を bud cells use し, こ の TAB2 の decomposition へ の I kappa B - zeta predominate の masato confirm with の が necessary で あ る.