染色体テリトリーと核タンパク質の同時可視化の開発に関する研究

染色体区域和核蛋白同步可视化发展的研究

• 批准号: 17050008
• 负责人: 田辺 秀之
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: The Graduate University for Advanced Studies
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050008/
• 关键词: 染色体テリトリー; 核内配置; 3D-FISH法; 核タンパク質; 可視化; 生体分子; 生細胞蛍光観察; 免疫染色

本研究では、核内染色体テリトリーとクロマチン間領域に存在する核タンパク質との間で、空間的にどのような相互作用が生じているかを明らかにすることを目的とし、染色体テリトリーと核タンパク質を同一核内で同時可視化する実験系の確立を目指した。これには通常の3D-FISH法に先立ち、核タンパク質の免疫蛍光染色を行い、その後、塩酸処理と熱変性処理を行ってDNAプローブをハイブリダイズさせるというステップを踏む。従って、塩酸処理と熱変性処理に耐性を示す抗体を用いる必要がある。培養細胞としてHeLa、Vero細胞を使用し、DNA領域としてヒト染色体ペインティングプローブ、ピストンDNAクラスター領域(6p21.3)、核タンパク質としてピストンH2B、LBR、Ki-67、Hp1-alpha、Coilin(Cajal body)、NELF(Negative Elongation Factor)などを対象とした、いくつかの組み合わせにおいて、蛍光及びハプテン標識抗体を検討した結果、熱変性処理に比較的強い耐性を示す抗体は、ビオチン標識2次抗体とCy3標識2次抗体であることが判明した。これらの核タンパク質のうち、コイリン、NELFは塩酸処理と熱変性処理により蛍光シグナルを消失してしまうため、予めpeameabilization処理後に免疫蛍光染色した時点で3次元画像(A)を取得し、その後、塩酸処理とペプシン処理を行い、3D-FISH法を実施して、再び3次元画像(B)を取得して(A)と(B)をマージすることで、染色体テリトリーと核タンパク質の同一核内における可視化を試みた。その結果、コイリン、NELF、ピストンDNA(6p21.3)の同一核内における可視化に成功した。今後はこの手法を応用し、染色体テリトリーとクロマチン間領域における核タンパク質との空間的な相互作用について詳細を明らかにしていく。

The purpose of this study is to establish a system of simultaneous visualization of chromosomes in the same nucleus. This is the usual 3D-FISH method for DNA preparation, nuclear staining, and thermal processing. The acid treatment and heat treatment are necessary for the application of antibodies. Culture cells HeLa Vero cells use DNA domain DNA domain (6p21.3), nuclear H2B, LBR, Ki-67, Hp1-alpha, Coilin (Cajal body), NELF(Negative Elongation Factor), anti-Cy 3 anti-Cy 3 anti- 3-D image (A) is obtained after acid treatment and heat treatment, and 3-D image (B) is obtained after acid treatment and heat treatment, and 3-D image (A) is obtained after heat treatment and heat treatment, and 3-D image (B) is obtained after heat treatment and heat treatment. Chromosome classification and nuclear quality of the same nucleus. The same nuclear DNA(6p21.3) was successfully visualized as a result of the above analysis. In the future, the method of chromosome separation and interaction between the two domains will be discussed in detail.

项目成果

Inter- and intra-specific gene-density-correlated radial chromosome territory arrangements are conserved in Old World monkeys

• DOI: 10.1159/000080824
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: CYTOGENETIC AND GENOME RESEARCH
• 影响因子: 1.7
• 作者: Tanabe, H;Küpper, K;Mizusawa, H
• 通讯作者: Mizusawa, H

Technical note. "Radial distribution of interphase chromosome territories in the human lymphocyte nucleus is highly correlated with their gene densities."

技术说明。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cytologia 70
• 作者: Hideyuki Tanabe;Katrin Kupper;Takafumi Ishida;Michaela Neusser;Hiroshi Mizusawa;Hideyuki Tanabe
• 通讯作者: Hideyuki Tanabe

染色体テリトリーの3次元核内配置解析 : 染色体再編成とゲノム進化学への応用

染色体区域的三维核排列分析：在染色体重排和基因组进化中的应用

• 发表时间: 2006
• 期刊: 生物の科学 遺伝 No.21(別刷)
• 作者: Izuta;H.;田辺 秀之
• 通讯作者: 田辺 秀之

Bloom helicase and DNA topoisomerase IIIα are involved in the dissolution of sister chromatids

• DOI: 10.1128/mcb.00702-06
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Seki, Masayuki;Nakagawa, Takayuki;Enomoto, Takemi
• 通讯作者: Enomoto, Takemi