染色体テリトリーと核タンパク質の同時可視化の開発に関する研究

染色体区域和核蛋白同步可视化发展的研究

• 批准号: 17050008
• 负责人: 田辺 秀之
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: The Graduate University for Advanced Studies
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050008/
• 关键词: 染色体テリトリー; 核内配置; 3D-FISH法; 核タンパク質; 可視化; 生体分子; 生細胞蛍光観察; 免疫染色

本研究では、核内染色体テリトリーとクロマチン間領域に存在する核タンパク質との間で、空間的にどのような相互作用が生じているかを明らかにすることを目的とし、染色体テリトリーと核タンパク質を同一核内で同時可視化する実験系の確立を目指した。これには通常の3D-FISH法に先立ち、核タンパク質の免疫蛍光染色を行い、その後、塩酸処理と熱変性処理を行ってDNAプローブをハイブリダイズさせるというステップを踏む。従って、塩酸処理と熱変性処理に耐性を示す抗体を用いる必要がある。培養細胞としてHeLa、Vero細胞を使用し、DNA領域としてヒト染色体ペインティングプローブ、ピストンDNAクラスター領域(6p21.3)、核タンパク質としてピストンH2B、LBR、Ki-67、Hp1-alpha、Coilin(Cajal body)、NELF(Negative Elongation Factor)などを対象とした、いくつかの組み合わせにおいて、蛍光及びハプテン標識抗体を検討した結果、熱変性処理に比較的強い耐性を示す抗体は、ビオチン標識2次抗体とCy3標識2次抗体であることが判明した。これらの核タンパク質のうち、コイリン、NELFは塩酸処理と熱変性処理により蛍光シグナルを消失してしまうため、予めpeameabilization処理後に免疫蛍光染色した時点で3次元画像(A)を取得し、その後、塩酸処理とペプシン処理を行い、3D-FISH法を実施して、再び3次元画像(B)を取得して(A)と(B)をマージすることで、染色体テリトリーと核タンパク質の同一核内における可視化を試みた。その結果、コイリン、NELF、ピストンDNA(6p21.3)の同一核内における可視化に成功した。今後はこの手法を応用し、染色体テリトリーとクロマチン間領域における核タンパク質との空間的な相互作用について詳細を明らかにしていく。

这项研究旨在阐明存在于染色质区域中存在的核染色体领土和核蛋白之间的空间相互作用，并旨在建立一个实验系统，该系统同时可视化同一核中的染色体领土和核蛋白。这涉及在通常的3D-FISH方法之前对核蛋白进行免疫荧光染色，然后进行盐酸处理和热变性处理，以杂交DNA探针。因此，有必要使用对盐酸处理和热变性处理具有抗体的抗体。 We investigated fluorescent and hapten-labeled antibodies in several combinations, including HeLa and Vero cells used as cultured cells, and targeted human chromosomal painting probes as DNA regions, piston DNA cluster regions (6p21.3), and piston H2B, LBR, Ki-67, Hp1-alpha, Coilin (Cajal body), and NELF (Negative Elongation Factor),和其他组合，发现对热变性处理表现出相对较强的抗体是生物素标记的二抗和CY3标记的二级抗体。在这些核蛋白蛋白中，Choilin和Nelf通过盐酸处理和热变性处理失去其荧光信号，因此，当辣椒处理治疗后预先进行免疫荧光染色时，我们获得了3D图像（A），然后再进行盐酸处理和盐酸治疗，并经过3D-Fish Modat，3D-Fish（3D）（FISH），（3D-FISH），以及3D-Fish Modat）（3D-Fish）（3D）。 （b），并试图可视化同一核内的染色体区域和核蛋白。结果，我们在同一核中成功地看到了Koilin，Nelf和活塞DNA（6p21.3）。将来，将应用此方法来阐明染色质区域中染色体区域与核蛋白之间的空间相互作用。

项目成果

Technical note. "Radial distribution of interphase chromosome territories in the human lymphocyte nucleus is highly correlated with their gene densities."

技术说明。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cytologia 70
• 作者: Hideyuki Tanabe;Katrin Kupper;Takafumi Ishida;Michaela Neusser;Hiroshi Mizusawa;Hideyuki Tanabe
• 通讯作者: Hideyuki Tanabe

Bloom helicase and DNA topoisomerase IIIα are involved in the dissolution of sister chromatids

• DOI: 10.1128/mcb.00702-06
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Seki, Masayuki;Nakagawa, Takayuki;Enomoto, Takemi
• 通讯作者: Enomoto, Takemi

染色体テリトリーの3次元核内配置解析 : 染色体再編成とゲノム進化学への応用

染色体区域的三维核排列分析：在染色体重排和基因组进化中的应用

• 发表时间: 2006
• 期刊: 生物の科学 遺伝 No.21(別刷)
• 作者: Izuta;H.;田辺 秀之
• 通讯作者: 田辺 秀之