角膜実質におけるtissue transglutaminaseの役割について

关于组织转谷氨酰胺酶在角膜基质中的作用

• 批准号: 15791019
• 负责人: 妙中 直子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791019/
• 关键词: t-TG; 角膜実質細胞; 細胞接着; コラーゲンゲル収縮; fibronectin; sodium butyrate; 細胞増殖; アポトーシス

【目的】tissue transglitaminase (t-TG)は様々な組織や細胞に発現し、細胞外マトリックス蛋白の共有結合や細胞の増殖、アポトーシス等に関与していると報告されているがその機能の詳細は不明である。我々はこれまでに培養ヒト角膜実質細胞にt-TGが発現し、t-TGが細胞増殖を抑制することを明らかにした.今回,角膜実質における細胞外でのt-TGの役割を検討する目的で培養ヒト角膜実質細胞を用いて細胞接着およびコラーゲンゲル収縮作用に対する外因性t-TGの影響について検討した。【方法】fibronectin(FN)、BSAをcoatingした培養皿にヒト角膜実質細胞を播種し、t-TG(0.01-0.1IU/ml)単独、あるいはt-TG(0.1IU/ml)にRGD peptide、RDE peptide(200-400μM)を同時添加した。37℃で90分間培養後、細胞接着数をMTT法で測定した。また、角膜実質細胞をI型コラーゲンゲル内に包埋し、上清にt-TG(0.1-0.3IU)単独、あるいはt-TG(0.1IU)にFN(10μg/ml)、TGF-β(0.1ng/ml)、PDGF(10ng/ml)を同時添加し、コラーゲンゲルの直径を経時的に測定した。【結果】t-TGは角膜実質細胞のFN、BSAに対する細胞接着を濃度依存性に促進した。RGD peptideはRGE peptideに比べこれらの促進作用を有意に阻害した。また、角膜実質細胞のコラーゲンゲル収縮はt-TGにより濃度依存性に促進した。FN、TGF-βおよびPDGFは角膜実質細胞のコラーゲンゲル収縮を促進したが、t-TGはこれらの促進作用をさらに促進した。【結論】t-TGは角膜実質細胞のコラーゲンゲル収縮を促進することが明らかとなった。また、t-TGの細胞接着促進作用にはRGD配列を認識するintegrinの関与が示唆された。

【Purpose】tissue transglitaminase (t-TG) Tissue and extracellular proteins are bound together in cells Propagation, アポトーシス, etc., and していると report, the details of the function are not clear. I have cultured corneal stromal cells, t-TG, and t-TG cells. Inhibition of cell proliferation and suppression of cell proliferation -TG's purpose is to cultivate corneal stromal cells and to use the cells to connect them. The contraction effect of びコラーゲンゲルに対するThe influence of exogenous t-TGについて検した. [Method] Fibronectin (FN), BSA coated in a culture dish, corneal stromal cells seeded, t-TG (0.01-0.1IU/ml), t-TG (0.1IU/ml), RGD peptide, RDE Peptide (200-400μM) was added at the same time. After incubation at 37°C for 90 minutes, the cells were then counted and measured using the MTT method.また, corneal epithelial cells type I コラーゲンゲル内に embedded し, supernatant にt-TG (0.1-0.3IU) only, あるいはt-TG (0.1IU) にFN ( 10μg/ml), TGF-β (0.1ng/ml), PDGF (10ng/ml) were added at the same time and the コラーゲンゲルの diameter was を経. [Results] t-TG stimulated the growth of corneal stromal cells and BSA stimulated cell growth in a concentration-dependent manner. RGD peptide and RGE peptide are both more effective than RGD peptide in promoting and inhibiting them.また, corneal epithelial cell のコラーゲンゲル contraction はt-TG により concentration-dependent に promotion した. FN, TGF-β およびPDGF は corneal stromal cell のコラーゲンゲル を promotion したが, t-TG はこれらの stimulating effect を さらに stimulating した. [Conclusion] t-TG can promote the contraction of corneal epithelial cells and promote the contraction of corneal epithelial cells.また, t-TGのcells then promote the action of RGD ligation and recognition of integrin and t-TG.